小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）定量檢測試劑盒（ELISA）

使用說明書

【試劑盒名稱】

小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）定量檢測試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）的含量。

 上海裕平生物科技公司高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商,，品質(zhì),，價格實惠,，售后完善,，并提供免費代檢測服務(wù),。
：-55123867  手機:-    

【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品,、待測樣本加入到預先包被小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）抗體的透明酶標包被板中，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標準品和樣品的OD值,，計算樣本中小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）含量。

【試劑盒組成】

備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：96,、48,、24、12,、6,、3ng/mL

【需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2,、標準規(guī)格酶標儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5,、一次性試管

6,、吸水紙

【操作步驟】

1、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復溫平衡30分鐘,。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。

6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加,。

7、溫育：重復4的操作,。

8,、洗板：重復5的操作。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL,，37℃避光顯色15min,。

10、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11,、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復凍融。

3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒,。

【注意事項】

1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。

2、酶標包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值，以減小實驗誤差,。

4,、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間,。

5,、為避免交叉污染，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣,，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜,。

6,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用,。

7,、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。

【操作程序總結(jié)】

準備試劑,，樣品和標準品

加入準備好的樣品和標準品，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次,，加入酶標試劑,，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次，加入顯色液A,、B,，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計算

【檢測范圍】

3-96ng/mL

【規(guī)格】

96人份/盒

【貯藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6個月

   上海裕平生物科技有限公司主要經(jīng)營各種品牌檔次的ELISA試劑盒,，*,，售后服務(wù)完善。并提供免費代檢測,。服務(wù)于高校及免疫學科研單位,。技術(shù)人員更好的為您服務(wù)。
本公司的更多產(chǎn)品,，請點擊公司：http://www.yupingbio.com/