人表皮生長因子（EGF）定量檢測試劑盒（ELISA）

使用說明書

【試劑盒名稱】

人表皮生長因子（EGF）定量檢測試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測人血清、血漿及相關液體樣本中表皮生長因子（EGF）的含量,。

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【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品、待測樣本加入到預先包被人表皮生長因子（EGF）單克隆抗體透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中人表皮生長因子（EGF）濃度呈正相關,，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中人表皮生長因子（EGF）含量,。

【試劑盒組成】

備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：800,、400、200,、100,、50、25pg/mL

【需要而未提供的試劑和器材】

1,、37℃恒溫箱

2,、標準規(guī)格酶標儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4,、蒸餾水

5,、一次性試管

6、吸水紙

【操作步驟】

1,、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復溫平衡30分鐘。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上,，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加。

4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加。

7,、溫育：重復4的操作,。

8、洗板：重復5的操作,。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL,，37℃避光顯色15min,。

10、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL,，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。

11,、測定：以空白孔調零,，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,，也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

【樣本要求】

1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2,、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。

3,、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。

【注意事項】

1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

2,、酶標包被板開封后如未用完,，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3,、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值,，以減小實驗誤差,。

4、牢記樣本已經稀釋5倍,，計算結果乘以5才是樣本實際濃度,。

5、本試劑盒定量范圍為25-800pg/mL,，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果,，請用標準品稀釋液稀釋后測定準確結果（25-800pg/mL范圍內）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6,、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間。

7,、為避免交叉污染,，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜。

8,、試劑盒保質期內使用,，不同批號的試劑不得混用。

9,、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。

【操作程序總結】

準備試劑，樣品和標準品

加入準備好的樣品和標準品,，37℃反應30分鐘

洗板4次,，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘

洗板4次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內讀OD值

計算

【檢測范圍】

25-800pg/mL

【規(guī)格】

96人份/盒

【貯藏】

2-8℃,，避光防潮保存,。

【有效期】

6個月

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