牛粘膜腹瀉病（BD）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于檢測牛血清,，血漿及相關液體樣本中粘膜腹瀉病（BD）水平,，感染人的血液學診斷,。

 上海裕平生物科技公司高品質ELISA試劑盒供應商，品質,，價格實惠,，售后完善，并提供免費代檢測服務,。
：-55123867  手機:-            

實驗原理：

  本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中牛粘膜腹瀉病（BD）,。用純化的牛粘膜腹瀉病（BD）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中粘膜腹瀉病（BD）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的粘膜腹瀉?。?/span>BD）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中牛粘膜腹瀉?。?/span>BD）的存在與否。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心,。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。

6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟：

1.         編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔,、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.         加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5,。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘

10.     終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定：

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為粘膜腹瀉?。?/span>BD）陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為粘膜腹瀉?。?/span>BD）陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

4．  封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存,。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,，使用時必須注意安全,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月

   上海裕平生物科技有限公司主要經(jīng)營各種品牌檔次的ELISA試劑盒,，*，售后服務完善,。并提供免費代檢測,。服務于高校及免疫學科研單位。技術人員更好的為您服務,。
本公司的更多產(chǎn)品,，請點擊公司：http://www.yupingbio.com/