資料簡介
牛粘膜腹瀉病(BD)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于檢測牛血清,,血漿及相關液體樣本中粘膜腹瀉病(BD)水平,,感染人的血液學診斷,。
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實驗原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標本中牛粘膜腹瀉病(BD),。用純化的牛粘膜腹瀉病(BD)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,可與樣品中粘膜腹瀉病(BD)相結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的粘膜腹瀉?。?/span>BD)抗體結合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,與CUTOFF值相比較,,從而判定標本中牛粘膜腹瀉?。?/span>BD)的存在與否。
試劑盒組成:
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2 |
陰性對照 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2 |
陽性對照 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2 |
濃縮洗滌液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2 |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應再次離心,。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2
6. 標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟:
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔,、陽性對照2孔,、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,,
3. 溫育:用封板膜封板后置
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,,
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
結果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為粘膜腹瀉?。?/span>BD)陰性
陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為粘膜腹瀉?。?/span>BD)陽性
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用,。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存,。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果,。
4. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存,。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,,參考波長為630nm
7.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2
2.有效期:6個月
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