如何選擇合適的蛋白酶抑制劑[選擇寶典]

　　即使蛋白酶對細(xì)胞功能很重要,，但你也有不想見到它們的時候,。比如，在純化蛋白質(zhì)的時候,，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧,，特別是低豐度蛋白。如今,，市場上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇,，幫助你在必要時停止蛋白酶的活性。 

即使蛋白酶對細(xì)胞功能很重要,，但你也有不想見到它們的時候,。比如，在純化蛋白質(zhì)的時候,，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧,，特別是低豐度蛋白。如今,，市場上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇,，幫助你在必要時停止蛋白酶的活性。

為了對付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶,，抑制劑的選擇也在不斷增加,。目前，主要有四種類型的蛋白酶,，根據(jù)他們活性位點中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶,。蛋白酶抑制劑可以特異針對一種蛋白酶,，也可以是廣譜的。生物通 www.ebiotrade,。,。ｃｏｍ 

人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類型,，以及它們可逆或不可逆，對蛋白酶抑制劑進(jìn)行分類,。如何選擇和使用,？這似乎是一個難題，光看名字就已經(jīng)讓人頭暈了,。下面讓我們來聽聽專業(yè)人士的建議,。

從雞尾酒開始

蛋白酶抑制劑的選擇，取決于每個用戶的個性化實驗,，不過對于裂解細(xì)胞或勻漿組織的應(yīng)用,，抑制劑混合物（或者說雞尾酒）通常是個比較保險的選擇，可阻斷不同的蛋白酶,。Abbexazui的抑制劑就是兩種混合物：Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF,；這兩者都適用于裂解液。“它們普遍適用,，適合許多樣品,，無論是新鮮還是FFPE組織，抑或不同的物種,，”Abbexa的Sabrina Calabressi談道,。

若研究人員希望保留目的蛋白，同時維持細(xì)胞健康,，默克密理博的Chandra Mohan也建議使用抑制劑混合物,。她建議選擇針對四種蛋白酶的抑制劑，如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III,。它可抑制哺乳動物細(xì)胞和組織中的天冬氨酸,、半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶以及氨肽酶。生物通 www.ebiotrade,。,。ｃｏｍ 

有時，不那么特異的抑制劑似乎是個更好的選擇,。“在裂解細(xì)胞或制備組織勻漿液時,，使用具有廣譜特異性的抑制劑，”Mohan說,。“它們應(yīng)當(dāng)快速反應(yīng),，與蛋白酶不可逆結(jié)合，并在蛋白純化后輕松去除,。”

盡管如此，選擇困難癥還是圍繞著你,。Abbexa認(rèn)為,，嘗試不同的類型是供應(yīng)商的責(zé)任,，而不是研究人員的。這家公司建議你和供應(yīng)商交流,，讓他們將利用自己的專業(yè)知識來幫你選擇,。通常，Abbexa在了解研究人員的特定分析,、樣品類型和應(yīng)用之后,，才推薦*的抑制劑。

考慮作用機(jī)制

對于某些類型的實驗,，你也許要在更小的范圍內(nèi)搜索抑制劑,。根據(jù)Mohan的建議，你需要先確定阻斷的是哪種類型的蛋白酶,，然后再選擇合適的抑制劑,。因為不同的抑制劑有不同的作用機(jī)制。

“蛋白酶抑制劑可能是可逆的,，也可能是不可逆的,，它們通過空間位阻來防止底物靠近活性位點，”Mohan說,。其他抑制劑可能通過修飾蛋白酶活性位點的氨基酸來發(fā)揮作用,。“比如，PMSF可讓絲氨酸蛋白酶失活,，它與活性絲氨酸發(fā)生反應(yīng),，其中氯甲基酮衍生物與活性位點中的催化三聯(lián)體反應(yīng)，”Mohan談道,。

先廣泛,，后具體

如今，抑制劑用在各種各樣的應(yīng)用中,，這也是人們需要謹(jǐn)慎選擇的一個原因,。“下游的處理和分析，將決定蛋白酶抑制劑的選擇和使用,，”Sigma-Aldrich的市場部Robert Gates談道,。例如，他補(bǔ)充說,，“液相蛋白質(zhì)組分析（如血清）可能需要蛋白酶的立即抑制,，因為它們會水解低豐度的目標(biāo)蛋白。”

事實上,，目前有這么多類型的抑制劑,，將它們分門別類還真是很困難。在選擇蛋白酶抑制劑時,，Gates建議從廣泛的開始,，然后不斷縮小范圍,。“*步可能是嘗試預(yù)先配置的雞尾酒，”他說,。“如果蛋白水解仍然存在,，可以采取針對特定組織和蛋白的方法。”

“我們的MS-Safe抑制劑混合物避免了PMSF和AEBSF抑制劑對蛋白的修飾,，也解決了磷酸酶的抑制,，”Gates說。“在理想情況下,，以后我們向樣品中添加一種混合物,，就能停止所有的蛋白水解，并且通過抑制磷酸酶,、激酶,、糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷酶的活性，凍結(jié)翻譯后的修飾,。”

我們是否能使用更少的抑制劑來抑制更多的蛋白酶,，這還有待觀察。不過,，在這么多的選擇中,，你肯定能找到一種有效的蛋白酶抑制劑，這是毫無疑問的,。