聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,，ELISA技術(shù)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭,，小毛巾,，洗滌瓶,。

小燒杯,、玻璃棒、試管,、吸管和量筒等,。

4℃冰箱，37℃孵育箱,。

實驗步驟

方法一　用于技術(shù)未知抗原的雙抗體夾心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃過一夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。(簡稱洗滌，下同),。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時。然后洗滌,。(同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔)。

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時，洗滌,。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ ”,、“-”號表示,。也可測O·D值：在ELISA技術(shù)儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。

方法二　用于技術(shù)未知抗體的間接法：

　　　　　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，

　　　　　　每孔加0.1ml,，4℃過一夜,。次日洗滌3次。

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　　　　　　加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔

　　　　　　中,置37℃孵育1小時,洗滌,。(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)

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　　　　　　于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，

　　　　　　37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。

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　　　　　　其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。