免疫組化中抗體選擇要求

1,、一抗選擇要點

（1）選擇單克隆還是多克隆抗體,。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合,，另一方面,，即使是同一個抗原決定簇，在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體,，形成好幾種單克隆抗體混雜物,，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,，一般單克隆抗體特異性強,，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對較低,；而多克隆抗體特異性稍弱,，抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等有所避免）,。

（2）種屬來源,。一般家兔來源的抗體多是多克隆,；而小鼠來源的抗體多是單克隆,，但也有另外。這條主要要與后面的二抗來源相匹配,。

（3）實驗?zāi)康氖菣z測什么種屬的抗原,，即species reactivity。這一點很重要,，一般說明書上都有注明,，如小鼠Ms、大鼠Rat,、人Hum等等,。

（4）能否做免疫組化。一般一抗說明書都會注明做WB,、IHC,、ICC、IF等,，建議選擇注明的抗體,，因為一般都是經(jīng)過文章證明。

（5）檢測標(biāo)本類型,。用于檢測石蠟切片還是冰凍切片,，一般能做石蠟切片的抗體，可能都可以用來檢測冰凍切片,，但能做冰凍切片的抗體,，不一定能檢測石蠟切片中的抗原。

（6）生產(chǎn)廠家,。我的經(jīng)驗是國外抗體生產(chǎn)商原裝抗體質(zhì)量一般沒問題,，但有點貴；而國內(nèi)分裝廠家用的一抗工作液,，價格便宜,，但有時結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差，尤其不同批次重復(fù)性較差,。

（7）價格與質(zhì)量的矛盾,。我個人認為一抗原裝質(zhì)量可能會好點，因為許多一抗避免反復(fù)凍融,，且在稀釋液中穩(wěn)定性較差（若時間長）,，但價格較貴,。

2、二抗選擇要點

（1）種屬來源,。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源,，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊,、兔等均可）,。

（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP,、Biotin,、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗,，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng),；而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明,、FITC,、Cy3等常用熒光素,。這主要與后面有無三抗和三抗種類有關(guān),。

（3）選擇IgM還是IgG。一般一抗是IgM,，那么二抗就選擇IgM,；反之，一抗是IgG,，則二抗選擇IgG,。