轉(zhuǎn)印膜:用于蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢驗過程的微孔膜,。
Southern blot:又稱Southern印跡雜交,,是研究DNA圖譜的基本技術(shù),。
Northern blot:又稱Northern印跡雜交,,是檢測RNA的基本技術(shù)。
Western blot:又稱Western印跡雜交,,是蛋白質(zhì)檢測分析的基本技術(shù),。
轉(zhuǎn)印膜在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測過程中應(yīng)用廣泛,不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同,,選擇正確,、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對達(dá)到好的實驗結(jié)果起到關(guān)鍵性的作用。
常用的三種轉(zhuǎn)印膜:硝酸纖維素膜(NC膜),、帶正電的尼龍膜(N66膜),、聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)
轉(zhuǎn)印
結(jié)合能力:帶正電的尼龍膜>PVDF膜>硝酸纖維素膜。
尼龍膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)480-600μg/cm2,,可結(jié)合短至10bp的核酸片段,;硝酸纖維素膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)80-100μg/cm2,對于200bp的核酸片段結(jié)合能力不強,;PVDF膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)125-300μg/cm2,。
結(jié)合穩(wěn)定性
更好的機械強度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇,;而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,特別是需要做N端蛋白測序,,在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下,,當(dāng)尼龍膜或者硝酸纖維素膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇,,但不適合熒光,。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡,才能用,。
溫度耐受性:
尼龍膜經(jīng)烘烤或紫外線照射后,,核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結(jié)合;硝酸纖維素膜依靠疏水性相互作用結(jié)合DNA,,結(jié)合不牢固,;PVDF膜結(jié)合牢固,耐高溫,,特別適合于蛋白印跡,。
機械強度:
硝酸纖維素膜較脆,易破碎,,不能重復(fù)使用,;尼龍膜和PVDF膜機械強度較高,可重復(fù)使用,。
價格比較:PVDF膜>硝酸纖維素膜>尼龍膜
可重復(fù)性:
尼龍膜可反復(fù)用于分子雜交,,雜交后,探針分子可經(jīng)堿變性被洗脫下來,;硝酸纖維素膜不能重復(fù)使用,;PVDF膜可以重復(fù)使用。
操作簡便性
NC膜的使用很簡便,,比如不需要甲醛預(yù)處理,,只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了,;比如NC膜很容易封閉,,也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間,,不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,,又容易卷,操作要小心,,不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途,。
背景:NC膜和PVDF背景較低;尼龍膜背景高,。
注:
1,、Biodyne B膜:通過高密度的季銨組來增加孔的表面,。我們所生產(chǎn)的尼龍膜具有高的靈敏度,適用于各種核酸應(yīng)用,。
BiodyneC膜:可以通過孔表面的羧基組耦合反應(yīng)來導(dǎo)出,。
2、醋酸纖維素膜
由于醋酸纖維素薄膜對各種蛋白質(zhì)(包括血清白蛋白,,溶菌酶及核糖核酸酶)都幾乎*不吸附,,因此無拖尾現(xiàn)象;電泳后區(qū)帶界限清晰,;通電時間較短(二十分鐘至一小時);對染料也沒有吸附,,因此不結(jié)合的染料能*洗掉,,無樣品處幾乎*無色。由于醋酸纖維素薄膜吸水量較低,,因此必需在密閉的容器中進(jìn)行電泳,,并使用較低有電流避免蒸發(fā)。同時其對蛋白的結(jié)合能力較其它轉(zhuǎn)移膜弱些,。
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