轉(zhuǎn)印膜:用于蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢驗(yàn)過(guò)程的微孔膜。
Southern blot:又稱Southern印跡雜交,,是研究DNA圖譜的基本技術(shù),。
Northern blot:又稱Northern印跡雜交,是檢測(cè)RNA的基本技術(shù),。
Western blot:又稱Western印跡雜交,,是蛋白質(zhì)檢測(cè)分析的基本技術(shù)。
轉(zhuǎn)印膜在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)用廣泛,,不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同,,選擇正確、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對(duì)達(dá)到好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果起到關(guān)鍵性的作用,。
常用的三種轉(zhuǎn)印膜:硝酸纖維素膜(NC膜),、帶正電的尼龍膜(N66膜)、聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)
轉(zhuǎn)印
結(jié)合能力:帶正電的尼龍膜>PVDF膜>硝酸纖維素膜,。
尼龍膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)480-600μg/cm2,,可結(jié)合短至10bp的核酸片段,;硝酸纖維素膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)80-100μg/cm2,,對(duì)于200bp的核酸片段結(jié)合能力不強(qiáng);PVDF膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)125-300μg/cm2,。
結(jié)合穩(wěn)定性
更好的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測(cè)中成為理想選擇,;而且單個(gè)凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,,特別是需要做N端蛋白測(cè)序,在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下,,當(dāng)尼龍膜或者硝酸纖維素膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,,所以PVDF也是要做蛋白測(cè)序的*選擇,但不適合熒光,。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過(guò)15秒)再用緩沖液平衡,,才能用。
溫度耐受性:
尼龍膜經(jīng)烘烤或紫外線照射后,,核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結(jié)合,;硝酸纖維素膜依靠疏水性相互作用結(jié)合DNA,結(jié)合不牢固,;PVDF膜結(jié)合牢固,,耐高溫,特別適合于蛋白印跡,。
機(jī)械強(qiáng)度:
硝酸纖維素膜較脆,,易破碎,不能重復(fù)使用,;尼龍膜和PVDF膜機(jī)械強(qiáng)度較高,,可重復(fù)使用。
價(jià)格比較:PVDF膜>硝酸纖維素膜>尼龍膜
可重復(fù)性:
尼龍膜可反復(fù)用于分子雜交,,雜交后,,探針?lè)肿涌山?jīng)堿變性被洗脫下來(lái);硝酸纖維素膜不能重復(fù)使用,;PVDF膜可以重復(fù)使用,。
操作簡(jiǎn)便性
NC膜的使用很簡(jiǎn)便,比如不需要甲醛預(yù)處理,,只要在無(wú)離子水面浸潤(rùn)排出膜內(nèi)氣泡,,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了;比如NC膜很容易封閉,,也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件,。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長(zhǎng)時(shí)間,不過(guò)要注意的是純的硝纖膜在比較脆,,又容易卷,,操作要小心,不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途,。
背景:NC膜和PVDF背景較低,;尼龍膜背景高。
注:
1、Biodyne B膜:通過(guò)高密度的季銨組來(lái)增加孔的表面,。我們所生產(chǎn)的尼龍膜具有高的靈敏度,,適用于各種核酸應(yīng)用。
BiodyneC膜:可以通過(guò)孔表面的羧基組耦合反應(yīng)來(lái)導(dǎo)出,。
2,、醋酸纖維素膜
由于醋酸纖維素薄膜對(duì)各種蛋白質(zhì)(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都幾乎*不吸附,,因此無(wú)拖尾現(xiàn)象,;電泳后區(qū)帶界限清晰;通電時(shí)間較短(二十分鐘至一小時(shí)),;對(duì)染料也沒(méi)有吸附,,因此不結(jié)合的染料能*洗掉,無(wú)樣品處幾乎*無(wú)色,。由于醋酸纖維素薄膜吸水量較低,,因此必需在密閉的容器中進(jìn)行電泳,并使用較低有電流避免蒸發(fā),。同時(shí)其對(duì)蛋白的結(jié)合能力較其它轉(zhuǎn)移膜弱些,。
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