石蠟切

PBS檸檬酸鹽緩沖液蒸餾水增強劑酶標(biāo)抗鼠 兔聚合物蘇木素酒精二甲苯樹膠鹽酸二氨基聯(lián)苯胺

烘箱微波盒塑料切片架顯微鏡膠頭滴管

1.  石蠟切片置于67℃烘箱中,，烘片2小時，脫蠟至水,，用pH7.4的PBS沖洗三次,，每次3分鐘（3×3’）。

2.  取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,，加入微波盒中,，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,，放入已沸騰的緩沖液中,，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻,，從緩沖液中取出玻片,，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’,。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的,，視具體情況而定）

3.  每張切片加1滴3%H₂O₂，室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。PBS沖洗3×3’。

4.  除去PBS液,，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,，室溫下孵育2小時。

5.  PBS沖洗3×5’,。除去PBS液,，每張切片加1滴聚合物增強劑，室溫下孵育20分鐘,。PBS沖洗3×3’,。

6.  除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物,，室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’。

7.  除去PBS液,，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺）,，顯微鏡下觀察5分鐘。

8.  蘇木素復(fù)染,，0.1%HCl分化,，自來水沖洗，藍化,，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，二甲苯透明,，中性樹膠封固，晾干后觀察,。

一,、特點

1.  在切片加上一抗后，第二抗體標(biāo)記多聚螯合物酶（HRP）的復(fù)合物與一抗結(jié)合,，在多聚螯合物上有大量的HRP分子,，使抗原信號有顯著的放大，其敏感性較SABC,、SP法高,。

2.  由于多聚物在體內(nèi)不存在，又不使用生物素,，從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色,，背景比SABC、SP法清晰,。

3.  辣根過氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上,，替代傳統(tǒng)方法的 二抗、三抗,，減少了實驗步驟,，且試劑孵育時間短，只需15分鐘,，使得方法更簡單,，實驗時間比SABC、SP法大為縮短,。