ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有很多種叫法,，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫試劑盒、ELISA Kit,、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶免試劑盒等,、酶聯(lián)免疫分析試劑盒,，比較常見(jiàn)的叫法是ELISA試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等,，常見(jiàn)的有國(guó)產(chǎn),，進(jìn)口分裝和進(jìn)口原裝。自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),，便得到世界科研工作者的極度認(rèn)可及推崇,，在歐美及中國(guó)獲得大量的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的發(fā)展,。 Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存，操作簡(jiǎn)便,，結(jié)果判斷較客觀等因素,，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

ELISA試劑盒原理
免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),，所以任何的診斷試劑離不開(kāi)的原料,，如抗原酶、抗體等,。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái),，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn),。
HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測(cè)模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗,。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,，可測(cè)得HBsAg變異樣品,，提高檢測(cè)的特異性（99.98%）提高檢測(cè)的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(shuō)（PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,，對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù),，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,，分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3,。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體,，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份,。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合物,，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性,。

用途
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi),。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度,。 ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體,。
然而,，影響ELISA試驗(yàn)結(jié)果的因素有很多,，所以加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn),。

ELISA試劑盒的特點(diǎn)
一、,、靈敏,、特異的抗體；
　　二,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；
　　三、吸附性好,，空白值低,，孔底透明度高的固相載體；
　　四,、適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標(biāo)本類型；
　　五,、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。

ELISA試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度，損失越少,，回收率越高,，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升,，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,，就是說(shuō)你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度,。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定,，樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L，取100mL被測(cè)水樣品,，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,，測(cè)定時(shí)忽略體積變化，如果測(cè)定出樣品中無(wú)機(jī)氯為2.98mg/L,，則認(rèn)為回收率為99%,。

組成結(jié)構(gòu)
1、 血清：操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2,、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、 細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液。
5,、 保存：如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
　　試劑盒成分
　　1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T
　　2 酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
　　3 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2
　　4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
　　5 標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
　　6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
　　7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1
　　8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說(shuō)明 1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒(méi)有提供) 酶標(biāo)儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)

雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 放置一晚。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌,，下同）,。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌,。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。
3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌,。
4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。
5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性,。

間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml,，每孔加0.1ml，4℃放置一晚,；
2.次日洗滌3次,；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
4.（同時(shí)做空白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘,，洗滌,；
6.’zui后一遍用DDW洗滌,。
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。

試驗(yàn)原理
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP,。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A,、B,，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系,。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
5． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
9． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
11． 加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
12． 按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

實(shí)驗(yàn)條件的選擇
在ELISA中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被,，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度,，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1,、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后,，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度,。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。
（3）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。
（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全,、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時(shí)間,，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入,。
進(jìn)口分裝：
檢測(cè)范圍和靈敏度不同，用量少時(shí),，可使用分裝,，前期是它的長(zhǎng)久性不是很好。
試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線zui高點(diǎn)OD 值均在2.0±0.2,，零孔的OD 值都控制在0.10以下,。
試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。
試劑盒重復(fù)性好,，板內(nèi),、板間變異系數(shù)均<9 %。
試劑的組份都多給20%的富余量,，確保完成48/96孔的檢測(cè),，避免分次檢測(cè)可能造成試劑量不足的情況。
檢測(cè)抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗(yàn)操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作,，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性,。
白介素6是一種細(xì)胞因子,已被證實(shí)為B細(xì)胞分化因子.它是一種抗體形成系統(tǒng),它的生理特性,如肝細(xì)胞急性蛋白合成的誘導(dǎo)和基于和白介素3協(xié)同作用的生長(zhǎng)等,也備受關(guān)注. 并且已證實(shí)白介素-6與病理學(xué)存在穩(wěn)定的相關(guān)關(guān)系.例如,報(bào)道多種疾病的生長(zhǎng)因子為白介素-6, 骨髓瘤細(xì)胞能合成白介素-6并表達(dá)白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測(cè)小鼠血清和細(xì)胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運(yùn)用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強(qiáng)度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測(cè)范圍 10.94的 700 pg/mL 預(yù)期用途

ELISA的樣本收集與前期準(zhǔn)備

        利用ELISA進(jìn)行臨床檢驗(yàn)常見(jiàn)的樣本一般包括血液（指血，靜脈血）,，尿,，糞便，腦脊液,，胸腹水,，前列腺液，精液,，陰道分泌物等,，這些樣本收集的時(shí)間,、方法和保存都有一定的要求。
(一) 臨床樣本的收集
A,、血液樣本
    有些生理因素,，如吸煙、進(jìn)食,、運(yùn)動(dòng),、情緒波動(dòng)、妊娠,、體位等均可影響血液中某些成分的變化,，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾,，以條件一致為宜,，如無(wú)法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素,。
1．外周血
    一般選取左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)采血,，該部位應(yīng)無(wú)凍瘡，炎癥,，水腫,，破損。如該部位不符合要求,，以其他手指部位代替,。對(duì)燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血,。由于部分血液常規(guī)檢測(cè)（如白細(xì)胞計(jì)數(shù),、分類等）受生理因素影響波動(dòng)過(guò)大，比較時(shí)宜使條件盡量一致,。涉及到體內(nèi)出,、凝血功能的檢測(cè)項(xiàng)目（如血小板計(jì)數(shù)，出血時(shí)間或凝血時(shí)間等）的檢測(cè),，一定要注意了解患者是否用過(guò)抗凝,、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響,。
2．靜脈血
    除涉及各種止血和血栓檢測(cè)等項(xiàng)目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數(shù)檢測(cè)項(xiàng)目的分析檢測(cè)可直接采用靜脈血的血清,。在血清檢測(cè)項(xiàng)目中,，有些（如血糖，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大,，一般以清晨空腹血標(biāo)本為宜,；有些在血中衰變較快（血清酶活性測(cè)定如ACP活性等）,，0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項(xiàng)目的檢測(cè)必須及時(shí)而快速,；有些（如肌酸激酶等）受運(yùn)動(dòng)等因素影響較大,。抽血時(shí)避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀,，LDH等的測(cè)定,。

B、尿液樣本
    同血標(biāo)本一樣,，尿液標(biāo)本受飲食,、運(yùn)動(dòng)、藥物量等因素的影響也較大,，特別是飲食的影響,，故一般來(lái)說(shuō)晨尿優(yōu)于隨機(jī)尿。晨尿是指清晨起床后的*次尿標(biāo)本,，較濃縮和酸化,，有形成分（如血細(xì)胞，上皮細(xì)胞,，管形）相對(duì)集中便于觀察,。隨機(jī)尿即隨意一次尿，留取方便,，但受飲食,、運(yùn)動(dòng)、藥物影響較甚,，易于出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果,，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿,，維生素C干擾潛血結(jié)果等,。餐后尿（午餐后2小時(shí)收集的患者尿液）適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查,，此時(shí)的尿標(biāo)本可增加試驗(yàn)敏感性,，檢出較輕微的病變。12小時(shí)尿細(xì)胞計(jì)數(shù)即Addis計(jì)數(shù)（前晚8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液）,，因時(shí)間較長(zhǎng),，細(xì)菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛,。24小時(shí)尿（*天晨8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液）中化學(xué)物質(zhì)的定量,，包括蛋白，糖，尿17-酮,、17-羥類固醇,，兒茶酚胺，Ca2+等,，檢測(cè)不同的物質(zhì),，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細(xì)菌培養(yǎng),，要求無(wú)菌,，沖洗外陰后留取標(biāo)本。所有尿標(biāo)本的收集都應(yīng)足量,，zui少12 ml,，50 ml，定時(shí)尿須全部收集,，對(duì)女性患者應(yīng)避免陰道分泌物,、經(jīng)血污染尿標(biāo)本。

C,、糞便樣本
    糞便標(biāo)本的檢測(cè)對(duì)判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價(jià)值,。采集時(shí)要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便,，對(duì)外觀無(wú)異常的糞便須從表面,、深處及糞端多處取材。找寄生蟲(chóng)蟲(chóng)體及作蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)應(yīng)收集24小時(shí)糞便,。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應(yīng)于排便后立即檢查,，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢,。查日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵時(shí)應(yīng)取粘液,、膿血部分，孵化毛蚴時(shí)至少留取30g糞便,，且需盡快處理,。檢查蟯蟲(chóng)卵須用透明薄膜拭子于晚12時(shí)或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗(yàn)（化學(xué)法）,，試驗(yàn)前3日禁食肉類及含動(dòng)物血食物并禁服鐵劑,，維生素C等。所有糞便標(biāo)本采集后1小時(shí)內(nèi)應(yīng)檢查完畢,，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞,。以上針對(duì)臨床樣本指標(biāo)檢測(cè)。

D,、腦脊液樣本
    腦脊液標(biāo)本采集后立即送檢,，放置過(guò)久將影響檢驗(yàn)結(jié)果：如細(xì)胞變性，破壞,，導(dǎo)致計(jì)數(shù)和分類不準(zhǔn),；有些化學(xué)物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少；細(xì)菌發(fā)生自溶影響細(xì)菌的檢出率,。腦脊液抽取后一般分裝三個(gè)無(wú)菌管,，*管作細(xì)菌培養(yǎng)，第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查,，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查,，三管的順序不宜顛倒。因標(biāo)本采集較難,，全部送檢和檢測(cè)過(guò)程應(yīng)注意安全,。

E、胸腹水樣本
    與腦脊液標(biāo)本一樣,，采集后的標(biāo)本注意安全,，及時(shí)送檢。一般也分裝三管,，一管作常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查,，一管生化檢查，一管細(xì)菌培養(yǎng),，順序以與腦脊液相同為宜,。

F、前列腺液樣本
    前列腺液標(biāo)本由前列腺按摩后采集,，液量少時(shí)直接滴在載玻片上及時(shí)送檢,，須注意防止標(biāo)本蒸干，量多時(shí)收集在潔凈干燥的試管中,。若按摩不出前列腺液,，可檢查按摩后的尿液沉渣。

G,、精液樣本
    精液標(biāo)本采集前應(yīng)禁欲3~7天,，排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時(shí)送檢,。由于精子生成日間變動(dòng)較大,，一般應(yīng)檢查2~3次（每次間隔1~2周）方可做診斷。

H,、陰道分泌物樣本
    陰道標(biāo)本采集前24小時(shí)應(yīng)禁止房事,、盆浴、陰道檢查,、陰道灌洗及局部上藥等,，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材,，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標(biāo)本,，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標(biāo)本。
 
 
 
(二) ELISA的樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行
檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,，-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    液體類標(biāo)本:  包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：
用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
    檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
6. 組織標(biāo)本
    切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用,。

植物組織：首先要稱取樣本的鮮重，樣本重量不能低于50mg,。
2,，勻漿液一般選取PBS（PH=7.2-7.4)濃度為0.01mol/L。
3,，勻漿的比例為10%,，即1g組織加9ml的勻漿液
1，保持樣本為鮮重,。
2,，樣本重量不能低于50mg
3，樣本溶解按照10%的比例,，即1g組織加9ml的勻漿液進(jìn)行溶解
4,，勻漿液選取PBS

2010-05-06 22:08 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 點(diǎn)擊次數(shù)：6810

HE染色石蠟切片制作的基本過(guò)程

1、取材與固定

從人或動(dòng)物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過(guò)0．5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10％福爾馬林,，Bouin氏固定液等)使組織,、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固,，以防止細(xì)胞死后的自溶或細(xì)菌的分解，從而保持細(xì)胞本來(lái)的形態(tài)結(jié)構(gòu),。

2,、脫水透明

一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份,。再將組織塊置于既溶于酒精,，又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊的中酒精,，才能浸蠟包埋,。

3、浸蠟包埋

將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中,，放入溶蠟箱保溫,。待石蠟*浸入組織塊后進(jìn)行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒)，倒入已溶化的石蠟,，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中,。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,，才能在切片機(jī)上切成很薄的切片,。

4、切片與貼片

將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上,，切成薄片,，一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折,，要放到加熱的水中燙平,，再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干,。

5,、脫蠟染色

常用HE染色，以增加組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異,，利于觀察,。蘇木精(Hematoxylin，H)是一種堿性染料,，可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色,，被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin,，E)是一種酸性染料,，能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性,。染色前,，須用二甲苯脫去切片中的石蠟,，再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精，zui后入蒸餾水,，就可染色,。

HE染色過(guò)程是：

①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。
　?、谒崴鞍彼蟹稚?，各數(shù)秒鐘。
　?、哿魉疀_洗1小時(shí)后入蒸餾水片刻,。
　　④入70％和90％酒精中脫水各10分鐘,。
　?、萑刖凭良t染色液染色2～3分鐘。

6,、脫水透明

染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明,。

7,、封固

將已透明的切片滴上加拿大樹(shù)膠，蓋上蓋玻片封固,。待樹(shù)膠略干后,，貼上標(biāo)箋，切片標(biāo)本就可使用,。