SA8899 SABC(小鼠IgG)-POD kit SABC法
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 SA8899
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/3/18 13:34:18
- 訪問次數(shù) 9
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1 kit |
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貨號 | SA8899 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
主要用途 | 適合于一抗為小鼠lgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)DAB顯色,。 |
諾博萊德 SABC(小鼠IgG)-POD kit SABC法
NobleRyder SA8899 SABC(小鼠IgG)-POD kitSABC(Mouse IgG)-POD Kit
產(chǎn)品貨號:SA8899
產(chǎn)品名稱:SABC(小鼠IgG)-POD kitSABC(Mouse IgG)-POD Kit
英文名稱:SABC(Mouse IgG)-POD Kit
產(chǎn)品規(guī)格:kit
產(chǎn)品簡介:
儲(chǔ)存條件:-20℃,,avoid light,,1 year
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
NobleRyder SA8899 SABC(小鼠IgG)-POD kitSABC(Mouse IgG)-POD Kit 適合于一抗為小鼠IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)DAB顯色。
SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測而設(shè)計(jì)的,,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),,同親和素一樣,,對生wu素有極gao的親和力,親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(PI=10),,經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì),。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,,因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低,。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,SABC大約可形成一百個(gè)左右的過氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物,。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性,。
操作步驟:(以石蠟切片為例)
1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯,三次乙醇),。
2. 3% H2O2 室溫處理5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶,。蒸餾水洗3次。
3.可選步聚:
a,、熱修復(fù)抗原,,將切片浸入 0.01M 檸檬酸鈉緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰 后斷電,間隔 5-10分鐘后,,反復(fù)1-2次,。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。
b,、酶消化,,滴加消化液,37℃10分鐘,,PBS(pH7.2-7.4)洗滌2-3次,。
c、跳過此步,,直接進(jìn)入下一步,。
4. 滴加5% BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 免洗,。
5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),,也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1小時(shí)左右或20℃ 2小時(shí)左右,,也可4℃過夜,。PBS(pH7.2-7.4)洗滌3次,,每次2分鐘。(一抗的稀釋度,、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度,、背景有直接關(guān)系。一般來說,,陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí),,可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時(shí)間;背景過高時(shí),,可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間,。)
6. 根據(jù)用量,用稀釋液將Bio-羊抗小鼠IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-羊抗小鼠IgG濃縮液混勻,,此工作液4℃可保存一周),。滴加Bio-羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 孵育30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗滌3次,,每次2分鐘,。
7.根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-POD濃縮液混勻,,此工作液4℃可保存一周),。滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分鐘,。PBS (pH7.2-7.4)洗滌4次,,每次5
分鐘。
8.DAB顯色:根據(jù)用量,,用PBS(pH7.2-7.4)配制,,按1ml PBS加入50ul 20×DAB顯色液A,加入50ul 20×DAB顯色液B ,。充分混勻后滴加到切片上,。室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,,一般在5-30分鐘之間,。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。
9.蘇木素輕度復(fù)染,。脫水,透明,封片,。顯微鏡觀察。
對于細(xì)胞爬片,,固定后,,PBS漂洗兩次,再用0.5% Triton X-100室溫孵育20分鐘,,PBS漂洗兩次,,3% H2O2處理15分鐘,;PBS漂洗兩次,接上述第4步,。
10.對于冰凍切片,,固定后,PBS漂洗兩次,,接上述第二步,。
注意事項(xiàng):
如果染色背景過高,在SABC反應(yīng)之后,,DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS洗2次,,然后DAB顯色,。
SABC(小鼠IgG)-POD kit SABC法
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