一,、實驗?zāi)康?/font>
掌握剖離果蠅幼蟲唾液腺的技術(shù)以及制作唾腺染色體玻片標(biāo)本的方法,；觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征；了解體細(xì)胞染色體聯(lián)會現(xiàn)象,。
二,、實驗原理
雙翅目昆蟲的幼蟲發(fā)育到一定時期后,，唾液腺細(xì)胞數(shù)不再增加，僅增長細(xì)胞大小,，而核內(nèi)染色體卻連續(xù)復(fù)制,，著絲粒不分離，形成由上千條螺旋狀的染色線構(gòu)成的多線染色體,。它比普通染色體大得多,，寬約5μm，長約400μm,，相當(dāng)于普通染色體的100～150倍,，因而又稱為巨大染色體。唾腺染色體的同源染色體常處于緊密配對狀態(tài),，稱“體細(xì)胞聯(lián)會”,，因而鏡下計數(shù)比一般體細(xì)胞染色體少一半。不同區(qū)段染色深淺不同,，形成了明暗相間,、寬窄不一的橫帶，這些橫帶的數(shù)目和位置往往是恒定的,，代表著果蠅等昆蟲的種的特征,。如染色體有缺失、重復(fù),、倒位,、易位等，很容易在唾腺染色體上識別出來,。
三,、實驗材料
黑腹果蠅的三齡幼蟲。
四,、實驗器具和藥品試劑
生化培養(yǎng)箱,、干燥箱、高壓滅菌鍋,、電磁爐,、微波爐、銻鍋,、雙筒解剖鏡,、顯微鏡、鑷子,、解剖針,、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、量筒,、載玻片,、蓋玻片、切片架,、切片盒,、棉塞、紗布,、牛筋,、玻棒、燒杯,、滴瓶、濾紙,。
95%乙醇,、無水乙醇、冰醋酸,、樹膠,、二甲苯、0.7%生理鹽水,、改良苯酚品紅染色液,。
五、實驗方法和步驟
（一）幼蟲的培養(yǎng)　在實驗前的兩個星期,，每一個培養(yǎng)瓶放1～2對果蠅（♀,、♂），控制產(chǎn)卵數(shù)量,。放在18～20℃條件下飼養(yǎng),，幼蟲才長得肥大，才能獲得較大的唾腺,。
（二）取唾腺　從瓶壁或培養(yǎng)基表面挑取一只肥大的三齡幼蟲,，先在盛有水
的培養(yǎng)皿中清洗身上的污物，然后把幼蟲放在干凈的載玻片上,，并滴一滴0.7%的生理鹽水,，在鏡下辨認(rèn)頭部和尾部。頭部稍尖,，并且有一黑點即口器,，不時地擺動。用兩根解剖針同時插在口器即黑點的地方,，左手或是右手輕緩地向前移動,，便可將頭部扯開，唾腺也隨之被拉出。這時可以看到一對透明而微白的長形小囊,，即唾腺（圖7-1）,。唾腺的側(cè)面常常有一些沫狀的脂肪體附著，可用解剖針剝離去,。如果唾腺被拉斷或未被拉出,，可用解剖針在頭部或身體處把其擠壓出來。

圖7-1  果蠅三齡幼蟲唾腺示意圖

（三）染色壓片　染色前先將頭部,、身體等部位其它雜質(zhì)清理干凈,，用一張吸水紙在遠(yuǎn)離唾腺的地方，將生理鹽水吸干,，滴一滴染色液染色4～7分鐘,。蓋上蓋片，將載片放在較平的桌面上,，其上覆一張小的吸水紙,，右手大拇指對準(zhǔn)腺體的地方用力往下壓（注意，不能讓蓋片滑動）,，唾腺染色體即被壓展開來,。
（四）觀察  壓好的玻片標(biāo)本，先在低倍鏡下檢查,，有好的典型細(xì)胞,，再換成高倍鏡觀察。通過觀察,，可以看到在四對染色體中,，*對染色體　　（X＿）組成一個長條，第二和第三對各自組成了具有左右兩臂的染色體對,，它們都以中部的著絲區(qū)聚集,，而第四對染色體很小，分布在著絲區(qū)呈點狀（不易觀察到）,。這樣,，從壓好的較為模式的片子中便可看到五條彎曲展開的染色體臂（X＿、ⅡL,、ⅡR,、ⅢL、ⅢR）,，和一個點狀的第四染色體對（圖7－2）,。

（五）*裝片　唾腺染色體伸展較好的標(biāo)本片，可通過下列步驟做成*裝片,。準(zhǔn)備四個大培養(yǎng)皿,，*個皿置一短玻棒，倒入固定液150ml，將有蓋片的面朝下,，一端搭在玻棒上,，在固定液中浸泡到蓋片落下來為準(zhǔn)，然后將載玻片翻轉(zhuǎn)1800,，與蓋片一起移到第二個皿處理一分鐘,，皿內(nèi)裝120 ml 95%乙醇，然后又移到第三和第四個皿中各處理一分鐘,，皿內(nèi)各裝120 ml無水乙醇,。從第四個皿中夾出載片和蓋片放到一張濾紙上，待片干之后即可封片,。封片時特別注意,，樹膠不能過多，只要一小小滴就夠了,。