細胞周期流式檢測(PI染色法) 1. 收集細胞:若懸浮生長細胞離心棄培養(yǎng)基,,用PBS洗滌一次(建議用PBS + 1% FBS或PBS + 0.1% BSA),,若是貼壁生長細胞,加入合適體積的0.25%胰酶消化一分鐘左右(可顯微鏡觀察待細胞脫壁),,吹起細胞后加入5ml 含10%血清的培養(yǎng)基,,終止作用,轉(zhuǎn)移細胞至15ml離心管中,,300g 離心5分鐘,,用PBS洗滌細胞一次; 2. 用PBS洗滌細胞一次,,300g離心5分鐘后棄上清,; 3. 用500ul PBS 重懸細胞,振蕩混勻后加入5ml 70%冷乙醇溶液(放置在-20度預(yù)冷的70%乙醇溶液),,混勻后放置4度過夜(可放置一周),; 4. 500g離心5分鐘后棄乙醇,用PBS懸浮細胞洗滌細胞一次,; 5. 用PBS調(diào)節(jié)細胞濃度為5 X 106個/ml,取500ul細胞懸液加入100ul 500ug/ml 的PI染色(用PBS配制500ug/ml的PI染色液),,4°C避光放置30分鐘; 6. 加入100ul 煮沸過的RNase A (10mg/ml) 37度孵育30分鐘,; 7. 混勻細胞后待上流式儀獲取分析,。
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