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PeproTech重組蛋白使用注意事項(xiàng)

來源:北京博蕾德生物科技有限公司   2013年06月17日 10:36  

PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA,、HAS或蔗糖等),并且通常以zui少量的鹽來進(jìn)行凍干處理,,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會(huì)沉積于管內(nèi),,形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,,務(wù)必在開蓋前先離心,,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時(shí)能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象),。
 
1.離心:高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
 
2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,,如10ug的產(chǎn)品,,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解),。溶解時(shí)不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間,,待細(xì)胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:
1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,,務(wù)必不可用鹽溶液,,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,,請依照說明書上的濃度,,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
 
3.分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液,,稀釋可用RPMI 1640,、DMEM或PBS等溶液,其中含有5-10%的FCS (小?;蛱ヅQ澹┗?.1 %的BSA(牛血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白,。工作液在4℃可保存1周,如需長期保存,,則需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-80℃),。分裝時(shí)每管中工作液的體積是一次實(shí)驗(yàn)的用量,以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一只工作液,,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低,。
 

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