zui常用的雙功能劑是戊二醛,。它的兩個醛基能與抗體（或其它蛋白質）和HRP的氨基或羥基結合,，而使二者偶聯在一起。常用二步標記法,，即*步先使戊二醛的一個醛基與HRP的氨基結合,，第二步再使戊二醛的另一個醛基與抗體的氨基結合。用此法所得的HRP-抗體結合物中,，HRP與抗體皆為單體,，分子量為200kD左右，抗體與酶活性保存60%左右,，缺點是結合率不高,。戊二醛二步法（AVrameas-Ternyck法，）具體操作步驟為：取辣根過氧化物酶10 mg溶于0.1 mol/L PBS（pH 6.8）中,，配成含1.25％戊二醛溶液0.2 ml,，室溫放置18h。用生理鹽水透析或經葡聚糖凝膠G-25除去戊二醛,，用生理鹽水補充至l ml,。加入含5 mg抗體的生理鹽水溶液l ml和l mol/L（pH9.5）碳酸鹽緩沖液0.1 ml，混勻后在4℃放置24h,。 加0.1 ml 0.2 mol/L賴氨酸溶液,，室溫中放置2h。用半飽和硫酸銨沉淀三次,，透析除去硫酸銨,，離心（1000 rpm，30min），取上清分裝凍存,，或加入等量60％甘油的PBS,，4℃貯存。用前1 mg蛋白加入1 mg小白鼠肝粉末吸收,，除去非特異反應物質,。

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