手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
收到細(xì)胞后,，首先觀察瓶身是否完好（注意有無縫隙,，裂痕）,；顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長狀況,，有無細(xì)胞漂??；用新潔爾滅消毒瓶口及瓶身；打開瓶口，再次用新潔爾滅消毒瓶口（可能會(huì)有液體溢出,，注意不要碰到液體）,，酒精燈烤瓶口消毒；將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至50ml離心管或廣口瓶中（若細(xì)胞漂浮嚴(yán)重,，離心培養(yǎng)基,，1000g*5分鐘，將離心后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至另一個(gè)大離心管中,，留一點(diǎn)吹打細(xì)胞沉淀成懸液,，回收細(xì)胞至原培養(yǎng)瓶），若漂浮不嚴(yán)重,，亦離心一下,；在原培養(yǎng)瓶中留一部分原裝培養(yǎng)液，再補(bǔ)加自己新配的培養(yǎng)基至適當(dāng)容積,，例如4ml,，讓細(xì)胞適應(yīng)一下環(huán)境。 當(dāng)細(xì)胞長到70-80%,，凍存大部分,，小部分傳代。
關(guān)鍵操作規(guī)范：
復(fù)蘇流程：
快速解凍：37℃水浴中搖晃凍存管,，5-10分鐘內(nèi)完成,，加入4-6mL培養(yǎng)基離心去除DMSO37。
初始接種：細(xì)胞懸液置于T25瓶或6cm皿,，24小時(shí)內(nèi)貼壁伸展,，48小時(shí)換液。
日常維護(hù)：
換液頻率：每周2-3次,，pH值穩(wěn)定在7.0-7.4,。
污染防控：嚴(yán)格無菌操作，定期檢測支原體,，使用雙抗預(yù)防細(xì)菌污染,。
異常處理：
貼壁失敗：復(fù)蘇24小時(shí)未貼壁的細(xì)胞存活率下降30%-50%，需棄用,。
消化成團(tuán)：吹打力度需輕柔均勻,，避免機(jī)械損傷。
注意事項(xiàng)：
1)細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,，表明細(xì)胞活力正常,，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細(xì)胞生長至匯合度80%,，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁,，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),，直到問題解決。
2)對于生長緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度,，或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長速度,。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品,，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任,。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品,，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問題,，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。
采購中心