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CELL-WISE品牌 CW003 Insect Cell Medium 昆蟲培養(yǎng)基具體介紹

來源:上海徠同生物科技有限公司   2025年07月09日 11:04  

CELL-WISE品牌 CW003 Insect Cell Medium 昆蟲培養(yǎng)基具體介紹

 

HSF95 Insect Cell MediumCW003

產(chǎn)品基本信息

  • 產(chǎn)品名稱HSF95 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基

  • 產(chǎn)品貨號CW003

  • 產(chǎn)品規(guī)格1L

產(chǎn)品描述

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CW003 培養(yǎng)基專為 sf9,、High Five 等昆蟲細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)及瞬時表達設(shè)計,含有細(xì)胞生長所需的全價營養(yǎng)體系,無需額外添加血清,、水解物等成分,可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)與重組蛋白生產(chǎn),。

產(chǎn)品特點

  1. 無血清配方:排除血清批間差異與外源污染風(fēng)險,,保障實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定性與生產(chǎn)工藝一致性。

2.   即用型全培養(yǎng)基:預(yù)配制完成,無需補加任何成分,,可直接用于細(xì)胞培養(yǎng),,簡化操作流程。

3.   高效培養(yǎng)性能:支持 sf9,、High Five 細(xì)胞的懸浮馴化與高密度培養(yǎng)(細(xì)胞密度可達 10?級水平),,適合大規(guī)模工藝放大。

4.   表達系統(tǒng)兼容:與桿狀病毒載體表達系統(tǒng)(BEVS)高度適配,,顯著提升重組基因蛋白的生產(chǎn)效率,。

基礎(chǔ)參數(shù)

2.png


產(chǎn)品使用方法

一、細(xì)胞馴化與傳代

1. 培養(yǎng)條件

  • 溫度27±0.5℃

  • 搖床轉(zhuǎn)速110-130 rpm(建議使用帶擋板搖瓶)

  • 傳代密度0.8-1.2×10? cells/mL(以活細(xì)胞計數(shù)為準(zhǔn))

2. 直接馴化

適用于多數(shù)已適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞系:

  • 直接以      CW003 培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基,,按日常傳代比例(如 1:3-1:5 稀釋)進行換液,,維持培養(yǎng)條件不變。

3. 漸進式馴化

適用場景:貼壁培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)ε囵B(yǎng)基成分敏感的細(xì)胞系

注意事項:選擇低代次(≤10 代),、處于對數(shù)生長期(活力≥95%)的細(xì)胞進行馴化,。

  • 階段

    • 在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞,連續(xù)傳代 2-3 次至生長穩(wěn)定,。

    • 采用混合培養(yǎng)基逐步過渡:原培養(yǎng)基:CW003 比例依次為 75:25→50:50→10:90,,每代維持細(xì)胞密度 0.8-1.1×10? cells/mL,每 48 小時傳代一次,。

  • 階段

    • 當(dāng)細(xì)胞在含≥90% CW003 的培養(yǎng)基中生長正常(倍增時間≤24 小時,,活力≥92%),可wan全過渡至 100% CW003 培養(yǎng)基,。

    • 連續(xù)傳代       3-4 次,,若細(xì)胞密度、活力及形態(tài)均保持穩(wěn)定,,即完成馴化,。

二、細(xì)胞復(fù)蘇

  1. 快速解凍

    • 從液氮中取出凍存管,,立即浸入 37℃水?。ㄝp微晃動),120 秒內(nèi)完成解凍,,至管內(nèi)僅剩少量冰晶,。

2.   換液重懸

    • 在生物安全柜中,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 50mL 無菌離心管,,加入 10mL 預(yù)熱至 37℃ CW003 培養(yǎng)基,。

    • 離心條件:175×g5 分鐘,,棄上清,。

    •       20-30mL 預(yù)熱培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,,轉(zhuǎn)移至搖瓶,初始培養(yǎng)密度建議為 0.3-0.5×10? cells/mL,。

三,、細(xì)胞凍存

1. 細(xì)胞準(zhǔn)備

  • 選擇處于對數(shù)生長期(活力≥98%)、狀態(tài)良好的細(xì)胞,,計數(shù)后調(diào)整密度,。

  • 凍存密度1.0-2.0×10? cells/mL(推薦 2.5-3.5×10? cells/mL 以提升復(fù)蘇效率)。

2. 凍存液配制(現(xiàn)用現(xiàn)配)

  • 配方45% 新鮮      CW003 培養(yǎng)基 + 45% 細(xì)胞培養(yǎng)上清(原培養(yǎng)基) + 10% DMSO(體積比),,充分混勻后置于 4℃預(yù)冷,。

3. 操作步驟

  • 離心收集細(xì)胞:175×g5 分鐘,,棄上清,。

  • 用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞,確保均勻無結(jié)塊,。

  • 分裝至無菌凍存管(1mL / 支),,標(biāo)注細(xì)胞信息與凍存日期。

  • 程序降溫

    • 將凍存管放入填充異丙醇的程序降溫盒(提前 4℃預(yù)冷),,置于 - 80℃冰箱過夜(降溫速率約 1℃/ 分鐘),。

    • 次日轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。

注意事項

  1. 培養(yǎng)基開封后需避光保存,,建議 30 天內(nèi)用完,,避免反復(fù)凍融。

2.   馴化,、復(fù)蘇及凍存過程中,,建議定期檢測細(xì)胞活力(臺盼藍染色法)與形態(tài),確保細(xì)胞狀態(tài)符合實驗要求,。

3.   高密度培養(yǎng)時,,需監(jiān)控溶氧(DO)與 pH 值,,必要時通過補料或氣體調(diào)控維持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定,。

 


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