CELL-WISE品牌 CW003 Insect Cell Medium 昆蟲培養(yǎng)基具體介紹

HSF95 Insect Cell Medium（CW003）

產(chǎn)品基本信息

• 產(chǎn)品名稱：HSF95 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基

• 產(chǎn)品貨號：CW003

• 產(chǎn)品規(guī)格：1L

產(chǎn)品描述

CW003 培養(yǎng)基專為 sf9,、High Five 等昆蟲細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)及瞬時表達設(shè)計，含有細(xì)胞生長所需的全價營養(yǎng)體系，無需額外添加血清,、水解物等成分，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)與重組蛋白生產(chǎn),。

產(chǎn)品特點

1. 無血清配方：排除血清批間差異與外源污染風(fēng)險,，保障實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定性與生產(chǎn)工藝一致性。

2.   即用型全培養(yǎng)基：預(yù)配制完成，無需補加任何成分,，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng),，簡化操作流程。

3.   高效培養(yǎng)性能：支持 sf9,、High Five 細(xì)胞的懸浮馴化與高密度培養(yǎng)（細(xì)胞密度可達 10?級水平）,，適合大規(guī)模工藝放大。

4.   表達系統(tǒng)兼容：與桿狀病毒載體表達系統(tǒng)（BEVS）高度適配,，顯著提升重組基因蛋白的生產(chǎn)效率,。

基礎(chǔ)參數(shù)

產(chǎn)品使用方法

一、細(xì)胞馴化與傳代

1. 培養(yǎng)條件

• 溫度：27±0.5℃

• 搖床轉(zhuǎn)速：110-130 rpm（建議使用帶擋板搖瓶）

• 傳代密度：0.8-1.2×10? cells/mL（以活細(xì)胞計數(shù)為準(zhǔn)）

2. 直接馴化

適用于多數(shù)已適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞系：

• 直接以      CW003 培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基,，按日常傳代比例（如 1:3-1:5 稀釋）進行換液,，維持培養(yǎng)條件不變。

3. 漸進式馴化

適用場景：貼壁培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)ε囵B(yǎng)基成分敏感的細(xì)胞系

注意事項：選擇低代次（≤10 代）,、處于對數(shù)生長期（活力≥95%）的細(xì)胞進行馴化,。

• 階段①：

• 在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞，連續(xù)傳代 2-3 次至生長穩(wěn)定,。

• 采用混合培養(yǎng)基逐步過渡：原培養(yǎng)基：CW003 比例依次為 75:25→50:50→10:90,，每代維持細(xì)胞密度 0.8-1.1×10? cells/mL，每 48 小時傳代一次,。

• 階段②：

• 當(dāng)細(xì)胞在含≥90% CW003 的培養(yǎng)基中生長正常（倍增時間≤24 小時,，活力≥92%），可wan全過渡至 100% CW003 培養(yǎng)基,。

• 連續(xù)傳代       3-4 次,，若細(xì)胞密度、活力及形態(tài)均保持穩(wěn)定,，即完成馴化,。

二、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 快速解凍：

• 從液氮中取出凍存管,，立即浸入 37℃水?。ㄝp微晃動），120 秒內(nèi)完成解凍,，至管內(nèi)僅剩少量冰晶,。

2.   換液重懸：

• 在生物安全柜中，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 50mL 無菌離心管,，加入 10mL 預(yù)熱至 37℃的 CW003 培養(yǎng)基,。

• 離心條件：175×g，5 分鐘,，棄上清,。

• 用       20-30mL 預(yù)熱培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，轉(zhuǎn)移至搖瓶，初始培養(yǎng)密度建議為 0.3-0.5×10? cells/mL,。

三,、細(xì)胞凍存

1. 細(xì)胞準(zhǔn)備

• 選擇處于對數(shù)生長期（活力≥98%）、狀態(tài)良好的細(xì)胞,，計數(shù)后調(diào)整密度,。

• 凍存密度：1.0-2.0×10? cells/mL（推薦 2.5-3.5×10? cells/mL 以提升復(fù)蘇效率）。

2. 凍存液配制（現(xiàn)用現(xiàn)配）

• 配方：45% 新鮮      CW003 培養(yǎng)基 + 45% 細(xì)胞培養(yǎng)上清（原培養(yǎng)基） + 10% DMSO（體積比）,，充分混勻后置于 4℃預(yù)冷,。

3. 操作步驟

• 離心收集細(xì)胞：175×g，5 分鐘,，棄上清,。

• 用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞，確保均勻無結(jié)塊,。

• 分裝至無菌凍存管（1mL / 支）,，標(biāo)注細(xì)胞信息與凍存日期。

• 程序降溫：

• 將凍存管放入填充異丙醇的程序降溫盒（提前 4℃預(yù)冷）,，置于 - 80℃冰箱過夜（降溫速率約 1℃/ 分鐘）,。

• 次日轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。

注意事項

1. 培養(yǎng)基開封后需避光保存,，建議 30 天內(nèi)用完,，避免反復(fù)凍融。

2.   馴化,、復(fù)蘇及凍存過程中,，建議定期檢測細(xì)胞活力（臺盼藍染色法）與形態(tài)，確保細(xì)胞狀態(tài)符合實驗要求,。

3.   高密度培養(yǎng)時,，需監(jiān)控溶氧（DO）與 pH 值,，必要時通過補料或氣體調(diào)控維持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定,。