CELL-WISE品牌 CW003 Insect Cell Medium 昆蟲(chóng)培養(yǎng)基具體介紹
CELL-WISE品牌 CW003 Insect Cell Medium 昆蟲(chóng)培養(yǎng)基具體介紹
HSF95 Insect Cell Medium(CW003)
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱:HSF95 昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基
產(chǎn)品貨號(hào):CW003
產(chǎn)品規(guī)格:1L
產(chǎn)品描述
CW003 培養(yǎng)基專為 sf9、High Five 等昆蟲(chóng)細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)及瞬時(shí)表達(dá)設(shè)計(jì),,含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的全價(jià)營(yíng)養(yǎng)體系,,無(wú)需額外添加血清,、水解物等成分,可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)與重組蛋白生產(chǎn),。
產(chǎn)品特點(diǎn)
無(wú)血清配方:排除血清批間差異與外源污染風(fēng)險(xiǎn),,保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定性與生產(chǎn)工藝一致性。
2. 即用型全培養(yǎng)基:預(yù)配制完成,,無(wú)需補(bǔ)加任何成分,可直接用于細(xì)胞培養(yǎng),,簡(jiǎn)化操作流程,。
3. 高效培養(yǎng)性能:支持 sf9、High Five 細(xì)胞的懸浮馴化與高密度培養(yǎng)(細(xì)胞密度可達(dá) 10?級(jí)水平),,適合大規(guī)模工藝放大,。
4. 表達(dá)系統(tǒng)兼容:與桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)(BEVS)高度適配,,顯著提升重組基因蛋白的生產(chǎn)效率。
基礎(chǔ)參數(shù)
產(chǎn)品使用方法
一,、細(xì)胞馴化與傳代
1. 培養(yǎng)條件
溫度:27±0.5℃
搖床轉(zhuǎn)速:110-130 rpm(建議使用帶擋板搖瓶)
傳代密度:0.8-1.2×10? cells/mL(以活細(xì)胞計(jì)數(shù)為準(zhǔn))
2. 直接馴化
適用于多數(shù)已適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞系:
直接以 CW003 培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基,按日常傳代比例(如 1:3-1:5 稀釋)進(jìn)行換液,,維持培養(yǎng)條件不變,。
3. 漸進(jìn)式馴化
適用場(chǎng)景:貼壁培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)ε囵B(yǎng)基成分敏感的細(xì)胞系
注意事項(xiàng):選擇低代次(≤10 代),、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(活力≥95%)的細(xì)胞進(jìn)行馴化,。
階段①:
在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞,連續(xù)傳代 2-3 次至生長(zhǎng)穩(wěn)定,。
采用混合培養(yǎng)基逐步過(guò)渡:原培養(yǎng)基:CW003 比例依次為 75:25→50:50→10:90,,每代維持細(xì)胞密度 0.8-1.1×10? cells/mL,每 48 小時(shí)傳代一次,。
階段②:
當(dāng)細(xì)胞在含≥90% CW003 的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)正常(倍增時(shí)間≤24 小時(shí),活力≥92%),可wan全過(guò)渡至 100% CW003 培養(yǎng)基,。
連續(xù)傳代 3-4 次,,若細(xì)胞密度、活力及形態(tài)均保持穩(wěn)定,,即完成馴化,。
二,、細(xì)胞復(fù)蘇
快速解凍:
從液氮中取出凍存管,立即浸入 37℃水?。ㄝp微晃動(dòng)),,120 秒內(nèi)完成解凍,至管內(nèi)僅剩少量冰晶,。
2. 換液重懸:
在生物安全柜中,,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 50mL 無(wú)菌離心管,加入 10mL 預(yù)熱至 37℃的 CW003 培養(yǎng)基,。
離心條件:175×g,5 分鐘,,棄上清,。
用 20-30mL 預(yù)熱培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,轉(zhuǎn)移至搖瓶,,初始培養(yǎng)密度建議為 0.3-0.5×10? cells/mL,。
三,、細(xì)胞凍存
1. 細(xì)胞準(zhǔn)備
選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(活力≥98%)、狀態(tài)良好的細(xì)胞,,計(jì)數(shù)后調(diào)整密度,。
凍存密度:1.0-2.0×10? cells/mL(推薦 2.5-3.5×10? cells/mL 以提升復(fù)蘇效率)。
2. 凍存液配制(現(xiàn)用現(xiàn)配)
配方:45% 新鮮 CW003 培養(yǎng)基 + 45% 細(xì)胞培養(yǎng)上清(原培養(yǎng)基) + 10% DMSO(體積比),,充分混勻后置于 4℃預(yù)冷,。
3. 操作步驟
離心收集細(xì)胞:175×g,,5 分鐘,棄上清,。
用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞,,確保均勻無(wú)結(jié)塊,。
分裝至無(wú)菌凍存管(1mL / 支),標(biāo)注細(xì)胞信息與凍存日期,。
程序降溫:
將凍存管放入填充異丙醇的程序降溫盒(提前 4℃預(yù)冷),,置于 - 80℃冰箱過(guò)夜(降溫速率約 1℃/ 分鐘),。
次日轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。
注意事項(xiàng)
培養(yǎng)基開(kāi)封后需避光保存,,建議 30 天內(nèi)用完,避免反復(fù)凍融,。
2. 馴化,、復(fù)蘇及凍存過(guò)程中,建議定期檢測(cè)細(xì)胞活力(臺(tái)盼藍(lán)染色法)與形態(tài),,確保細(xì)胞狀態(tài)符合實(shí)驗(yàn)要求,。
3. 高密度培養(yǎng)時(shí),,需監(jiān)控溶氧(DO)與 pH 值,必要時(shí)通過(guò)補(bǔ)料或氣體調(diào)控維持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定,。
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