英文名稱：DyLight 550 Phalloidin

中文名稱：DyLight 550 鬼筆環(huán)肽

DyLight 550 鬼筆環(huán)肽是一種結合了熒光染料DyLight 550與鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的復合物,，常用于細胞生物學研究中特異性標記肌動蛋白纖維（F-actin）,，以實現(xiàn)細胞骨架結構的可視化。其制備過程需經(jīng)過多步化學修飾與純化,，確保熒光標記的穩(wěn)定性及鬼筆環(huán)肽的生物活性,。

制備步驟詳述

1. 鬼筆環(huán)肽的提取與純化
   鬼筆環(huán)肽是一種從毒蘑菇（如鵝膏菌屬）中分離的環(huán)狀七肽，具有高親和力結合F-actin的特性,。其制備首先需通過溶劑萃取法從蘑菇子實體中提取粗肽混合物,，隨后利用離子交換色譜或反相高效液相色譜（RP-HPLC）進行分離純化。此步驟需嚴格控制pH值與鹽濃度,，以避免肽鏈降解,，最終獲得高純度鬼筆環(huán)肽單體。

2. DyLight 550染料的活化
   DyLight 550是一種磺化花菁類熒光染料,，具有水溶性好,、光穩(wěn)定性強的特點。其活化需通過化學修飾引入活性基團（如N-羥基琥珀酰亞胺酯,，NHS-ester）,。具體操作為：將DyLight 550溶解于無水二甲基亞砜（DMSO）中，加入三乙胺（TEA）調節(jié)pH至堿性,，隨后緩慢滴加NHS與二環(huán)己基碳二亞胺（DCC）的混合溶液,，室溫攪拌反應4-6小時，生成活性酯中間體,。反應結束后通過硅膠柱層析純化,，去除未反應的小分子雜質。

3. 鬼筆環(huán)肽與染料的偶聯(lián)反應
   將純化后的鬼筆環(huán)肽溶解于磷酸鹽緩沖液（PBS,，pH 7.4）,，逐滴加入活化后的DyLight 550-NHS酯溶液，在冰浴條件下緩慢攪拌反應2小時,。此過程中,，染料的活性酯基團與鬼筆環(huán)肽側鏈的賴氨酸殘基氨基發(fā)生共價結合，形成穩(wěn)定的酰胺鍵,。反應體系需保持無氧環(huán)境（通氮氣保護）,，以防止氧化副反應。

4. 產(chǎn)物分離與純化
   偶聯(lián)反應完成后,，通過RP-HPLC分離未反應的染料與偶聯(lián)產(chǎn)物,。選用C18色譜柱，以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫,，收集目標峰對應的洗脫液,。隨后利用超濾離心管（截留分子量3 kDa）對產(chǎn)物進行濃縮與脫鹽處理，最終獲得DyLight 550鬼筆環(huán)肽凍干粉,，保存于-20℃避光環(huán)境,。

應用與注意事項

DyLight 550鬼筆環(huán)肽可通過微注射或細胞滲透劑（如皂苷）導入活細胞,，或直接用于固定細胞的F-actin染色。其激發(fā)波長為557 nm,，發(fā)射波長為570 nm,，兼容大多數(shù)熒光顯微鏡系統(tǒng)。制備過程中需嚴格遵循無菌操作規(guī)范,，避免交叉污染,，同時需通過質譜分析驗證偶聯(lián)產(chǎn)物的分子量，確保標記效率與化學穩(wěn)定性,。

產(chǎn)地：西安瑞禧生物

用途：科研

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