DyLight 550 MAL streptavidin/馬來酰亞胺標記鏈霉親和素的制備過程
英文名稱:DyLight 594 Maleimide-Labeled Streptavidin
中文名稱:DyLight 594 馬來酰亞胺標記鏈霉親和素
一、物質概述
DyLight 594 MAL 鏈霉親和素是一種通過化學修飾將熒光染料DyLight 594與鏈霉親和素(Streptavidin)結合的復合物,。其核心功能基團為馬來酰亞胺(Maleimide, MAL),,用于特異性標記含巰基(-SH)的生物分子,。該復合物在生物標記領域具有應用潛力,其制備過程涉及多步化學與生物技術操作,。
二,、制備步驟
1. 鏈霉親和素的純化
鏈霉親和素通常從細菌(如阿維丁鏈霉菌)發(fā)酵液中提取。通過多步色譜技術(如離子交換層析,、親和層析)分離純化,,獲得高純度的天然或重組鏈霉親和素,。純化后的蛋白需通過SDS-PAGE和紫外吸收光譜驗證純度與濃度,。
2. DyLight 594 馬來酰亞胺染料的活化
DyLight 594 MAL染料為商業(yè)化試劑,,其馬來酰亞胺基團需在堿性條件下(如pH 7.5-8.5的磷酸鹽緩沖液)保持穩(wěn)定。制備時需避免染料水解或氧化,,通?,F(xiàn)配現(xiàn)用或避光保存于低溫環(huán)境中。
3. 鏈霉親和素的馬來酰亞胺標記
將純化的鏈霉親和素與DyLight 594 MAL染料按一定摩爾比(通常為1:5至1:10)混合于標記緩沖液(如含0.1 M NaCl的PBS,,pH 7.4),。反應需在避光條件下進行,溫度控制在4-25℃,,持續(xù)2-4小時,。馬來酰亞胺基團與鏈霉親和素表面的游離巰基(如賴氨酸殘基的側鏈)發(fā)生共價結合。
4. 未反應染料的去除
標記完成后,,通過凝膠過濾層析(如Sephadex G-25柱)或超濾離心法去除未結合的游離染料。收集含標記復合物的洗脫峰,,并通過紫外分光光度計測定染料與蛋白的結合比例(通常為3-5個DyLight 594分子/鏈霉親和素分子),。
5. 復合物的保存
標記后的DyLight 594 MAL鏈霉親和素需分裝后避光保存于-20℃,避免反復凍融,。緩沖液可選用含0.1% BSA或1 mM EDTA的PBS,,以增強穩(wěn)定性。
三,、結構與特性
該復合物保留了鏈霉親和素的高親和力(對生物素Kd≈10?1? M)和四聚體結構,,同時引入DyLight 594的熒光特性(激發(fā)峰約593 nm,發(fā)射峰約618 nm),。馬來酰亞胺基團的引入使其能夠特異性標記含巰基的分子(如抗體,、肽段),擴展其在生物檢測中的應用場景,。
四,、注意事項
制備過程中需嚴格控制pH、溫度及避光條件,,以減少非特異性結合和染料降解,。標記比例需通過實驗優(yōu)化,避免過高比例導致空間位阻或熒光猝滅,。
產地:西安瑞禧生物
用途:科研
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