一、實驗原理

用抗-HBe包被固相載體后,，同時加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg，若被檢血清中含有抗-HBe，則與包被抗-HBe競爭結(jié)合HBeAg,，被檢標(biāo)本中抗-HBe越多，HBeAg被結(jié)合越多,，而與包被抗-HBe結(jié)合就越少,，加底物后顯色就越淺；反之越深,。

二,、主要試劑與器材

ELISA試劑盒：內(nèi)含已包被抗-HBe板條、HRP-抗HBe溶液,、中和試劑HBeAg溶液,、陽性和陰性對照血清，底物溶液（A液,、B液）,、終止液、洗滌液,。

三,、結(jié)果分析

1.P/N≤0.3為陽性。P/N＞0.3為陰性,。

2.P/N=待檢血清OD值/陰性對照OD值,。

四、注意事項

1.試劑置2-4℃保存,。取用時應(yīng)先置室溫平衡,。干包被板條須密封防潮，凍存,，取用后余者及時封存,。

2.恰當(dāng)選好HBeAg的濃度,。

3.試劑用前應(yīng)搖勻。

五,、操作步驟

1.加樣：取出干包板條,，按編號順序分別加50μl待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清于相應(yīng)孔中,。設(shè)空白對照孔,，除此孔外，每孔加HBeAg50μl,、HRP-抗HBe50μl,，振蕩混勻后，置43℃（或37℃）溫育1h,。

2.洗滌：甩去孔內(nèi)液體,，用洗滌液注滿各孔，靜置20s,，甩干,。如此重復(fù)洗滌4次，在吸水紙上拍干,。

3.顯色：每孔加顯色劑A,、顯色劑B各50μl，振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min,。

4.終止：每孔加終止液50μl,，振蕩混勻。

5.酶標(biāo)儀檢測：選用450nm波長,，用空白孔調(diào)零之后測各孔OD值,。