一、配制培養(yǎng)基:50mL的培養(yǎng)基,,可以用450mI DMEM (89%)+50ml胎牛血清(10%)+5ml雙抗(1%)配制。
二,、配制細(xì)胞凍存液:現(xiàn)配現(xiàn)用,,根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整培養(yǎng)基、血清和DMSO的比例,,通常為6:3:1或7:2:1,。例如,對于存活率高的細(xì)胞系,,可以用培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1的比例配制,,對于存活率低的細(xì)胞系或需要長時(shí)間保存的細(xì)胞系,可以增加血清濃度,。
血清使用注意事項(xiàng)
一,、避免反復(fù)凍融。血清解凍后,,可在2-8℃條件下儲存6周,。如解凍后的血清儲存時(shí)間需要大于6周,建議分裝成合適的體積并重新凍存,。
二,、如血清中含有大量的沉淀,不建議直接過濾血清,。如有過濾需求,,可將血清分裝至無菌離心管中,稍微離心,,取上清液直接加入培養(yǎng)基內(nèi)混合后再過濾,。
三、血清沒有混勻且放置于高于40℃的水浴中,,底部的蛋白會變性形成沉淀,。
四、使用時(shí)注意無菌操作,,防止細(xì)菌污染
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