人外周血PBMC的CD4+ T細(xì)胞磁珠分選及流式鑒定

來(lái)源：上海達(dá)為科生物科技有限公司 2025年05月27日 09:13

一,、人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分離

1. 3ml抗凝血加入3ml 1×PBS進(jìn)行稀釋,。

2. 在15ml離心管內(nèi)加入3ml淋巴細(xì)胞分離液,，再在液面上方平鋪3ml稀釋過(guò)的抗凝血,，常溫下，水平離心機(jī)600g,，離心30min,。

3. 吸取中間白膜層細(xì)胞，加入15ml離心管中,，再加入10ml 1×PBS混勻,，常溫下，1000rpm,，離心10min,，棄上清，每管加入2ml MACS緩沖液重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù),，調(diào)整細(xì)胞數(shù)量,，每個(gè)樣本不超過(guò)107個(gè)細(xì)胞。

4. 2000rpm,，離心3min,，棄上清。

二、磁珠分選

1. 每管加入40ul MACS緩沖液重懸細(xì)胞,，再加入10ul CD4+T Cell Biotin-Antibody Cocktail, human，混勻,，4℃孵育5min,。

2. 每管加入30ul MACS緩沖液，再加入20ul CD4+T Cell MicroBead Cocktail,human,，混勻,，4℃孵育10min。

3. 將分選柱置于磁力架上,，加入3ml MACS緩沖液潤(rùn)洗柱子,，待液體不再流出，更換新的離心管,。

4. 將細(xì)胞懸液加入分選柱,，待液體不再流出，加入3ml MACS緩沖液洗柱子,，液體收集完畢,，將離心管撤離后，再將分選柱撤下,。

5. 將收集到的細(xì)胞懸液進(jìn)行離心,，1500rpm，5min,，去上清,。

三、流式鑒定

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