細胞培養(yǎng)關鍵事項

1.如何選用培養(yǎng)基,？
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長,?？傊xMEM做粘附細胞培養(yǎng),、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng),，各種目的無血清培養(yǎng)的選是AIM V培養(yǎng)基（SFM）。在開始進行新的細胞培養(yǎng)時,，可以參考下表所列的條件：

2.為什么要熱滅活血清,？
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,，刺激平滑肌收縮,，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞,。在進行免疫學研究,、培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,，推薦使用熱滅活血清,。

3.L－谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎,？
L－谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的,。脫掉氨基后，L－谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L－谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有最終確定,。L－谷氨酰胺的降解導致氨的形成,，而氨對于一些細胞具有毒性。

4.GlutaMAX-I是什么,？培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I,？這個二肽有多穩(wěn)定,？
GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物,，將其不穩(wěn)定的α－氨基用L－丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L－谷氨酰胺供利用,。
GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘,，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,，如果在相同條件下，L－谷氨酰胺幾乎完全降解。

5.為什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色,，酸性時為黃色，堿性時為紫色,。研究表明,，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應,，培養(yǎng)細胞,，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測,，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。

6.如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞,？
用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200－2000個/毫升，在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液,。輕輕混勻,，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞,?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞,。

7.如何消除組織培養(yǎng)的污染,？
當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染,。首先,，確定污染物是細菌、真菌,、支原體或酵母,，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,，檢查HEPA過濾器,。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而,，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。