143B人骨肉瘤細(xì)胞綜合解析

來源：武漢尚恩生物技術(shù)有限公司 2025年05月08日 10:26

　　143B人骨肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)條件與操作規(guī)范：

　　1. 培養(yǎng)基與環(huán)境

　　基礎(chǔ)培養(yǎng)基：DMEM或MEM,，補(bǔ)充10%胎牛血清(FBS),、1%雙抗(青霉素/鏈霉素),。

　　培養(yǎng)條件：37℃,、5% CO?、飽和濕度,，培養(yǎng)箱濕度建議70%-80%,。

　　容器適配：T25瓶(8-10mL培養(yǎng)基)、10cm皿(12-15mL),，根據(jù)細(xì)胞密度調(diào)整換液頻率(每2-3天一次),。

　　2. 關(guān)鍵操作步驟

　　復(fù)蘇：

　　37℃水浴快速解凍，離心(1000rpm,，3-5min)去除凍存液,。

　　新鮮培養(yǎng)基重懸后接種，次日觀察細(xì)胞貼壁情況,。

　　傳代：

　　密度達(dá)80%-90%時(shí),，用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞間隙變大即終止消化,。

　　傳代比例1:2至1:4,，輕柔吹打避免氣泡，維持細(xì)胞活性,。

　　凍存：

　　凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO,，密度0.5-1×10?細(xì)胞/mL。

　　程序降溫盒-80℃過夜后轉(zhuǎn)液氮,，需復(fù)蘇驗(yàn)證活性,。

　　3. 質(zhì)量控制

　　鑒定與檢測(cè)：定期進(jìn)行STR鑒定和支原體檢測(cè)，確保遺傳背景穩(wěn)定且無污染,。

　　狀態(tài)監(jiān)測(cè)：傳代后鏡檢并拍照記錄,，觀察細(xì)胞形態(tài)及碎片情況，及時(shí)清理死細(xì)胞,。

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