一、菌落計(jì)數(shù)的一般步驟

1,、樣品的稀釋

2、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

3,、結(jié)果與報告

二,、具體過程

1、樣品的稀釋

（1）固體和半固體樣品

稱取25g置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min,，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min,，制成1：10的樣品勻液,。

（2）液體樣品

以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻,，制成1：10的樣品勻液,。

上步完成后，用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1mL,，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭不要觸及稀釋液面）,，振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液,。

根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì),，選擇1個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時,，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi),，每個稀釋度做兩個平皿。同時,，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照,。

之后，及時將15mL～20mL冷卻至48℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于48℃±2℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿,，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻,。

2、注意事項(xiàng)

移液過程使用的器具,，都應(yīng)避免微生物污染,。使用耐高壓移液槍，核查洗耳球無菌程度，避免移液槍觸及均質(zhì)袋或試管內(nèi)壁……

樣品勻液完成后,，可按相同操作,，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,，換用1次1mL無菌吸管或吸頭,。

3、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

樣品稀釋完成后,，就要進(jìn)行培養(yǎng)和菌落計(jì)數(shù)了,。

待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn),，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h,。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。

如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時,，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL）,，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按相同條件進(jìn)行培養(yǎng),。

培養(yǎng)完成后,，就要進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)了，計(jì)數(shù)可用肉眼觀察,，必要時用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器,，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units,，CFU）表示,。

選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù),。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù),，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù),。

（1）大片菌落

其中一個平板有較大片狀菌落生長時,，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù),；若片狀菌落不到平板的一半,，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板后乘以2,，代表一個平板菌落數(shù),。

（2）鏈狀生長

當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計(jì)數(shù),。

（3）結(jié)果與報告

為了生成結(jié)果和報告,，需要根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果和公式計(jì)算出菌落總數(shù),。需要注意的是，對于菌落數(shù)量不同的培養(yǎng)皿,，計(jì)數(shù)原則有所不同。

若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù),，則報告菌落蔓延,。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效,。

稱重取樣以CFU/g為單位報告,，體積取樣以CFU/mL為單位報告。

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