百歐博偉生物：內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法都是常用的定量分析方法,，在不同的分析條件下,，面對(duì)不同的要求,，再加上分析成本和效率等因素的考慮,，靈活選用簡(jiǎn)單而有效的定量方法很重要,。那么，如何選用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法,？它們各有什么優(yōu)缺點(diǎn),？本期我們特整理了相關(guān)內(nèi)容，希望對(duì)大家有所幫助,！

一,、外標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)

1、什么是外標(biāo)法,？

用待測(cè)組分的已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（作為對(duì)照物）繪制校準(zhǔn)曲線,，以對(duì)照物質(zhì)和樣品中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的方法，稱為外標(biāo)法,。

具體做法是：用待測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列,，在與待測(cè)組分相同的色譜條件下，等體積準(zhǔn)確量進(jìn)樣,，測(cè)量各峰的峰面積或峰高,，用峰面積或峰高對(duì)樣品濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，此標(biāo)準(zhǔn)工作曲線應(yīng)是通過(guò)原點(diǎn)的直線,。

若標(biāo)準(zhǔn)工作曲線不通過(guò)原點(diǎn),，說(shuō)明測(cè)定方法存在系統(tǒng)誤差。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率即為校正因子,。

2,、外標(biāo)法優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)：

（1）操作、計(jì)算簡(jiǎn)單,；

（2）無(wú)需各組分都被檢出,、洗脫,；

（3）適用于大量樣品的分析。

缺點(diǎn)：

（1）實(shí)驗(yàn)條件要求高,，標(biāo)樣及未知樣品的測(cè)定條件要一致,，如：檢測(cè)器的靈敏度，流速,、流動(dòng)相組成不能發(fā)生變化,；

（2）進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確，每次進(jìn)樣體積要有好的重復(fù)性,。

二,、內(nèi)標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)

1、什么是內(nèi)標(biāo)法,？

內(nèi)標(biāo)法是一種間接的校準(zhǔn)方法,，是在建立校準(zhǔn)曲線時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)序列里加入相同量的物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物,，根據(jù)被測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比,，來(lái)計(jì)算被測(cè)組分的含量。

具體做法是：在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),，它可被色譜柱所分離,，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積與相對(duì)響應(yīng)值,，即可求出待測(cè)組分在樣品中的百分含量,。

2、內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)缺點(diǎn)

一般用外標(biāo)法來(lái)定量,，如果進(jìn)樣體積很難掌握,，就用內(nèi)標(biāo)法，可以消除進(jìn)樣體積的誤差,。那內(nèi)標(biāo)法有哪些優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),，一起看一下：

優(yōu)點(diǎn)：

進(jìn)樣量的變化、色譜條件的微小變化,，對(duì)內(nèi)標(biāo)法定量結(jié)果的影響不大,，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取,、衍生化等）前加入內(nèi)標(biāo)物,，然后再進(jìn)行前處理時(shí)，可部分補(bǔ)償欲測(cè)組分在樣品前處理時(shí)的損失,。若要獲得很高精度的結(jié)果時(shí)，可以加入數(shù)種內(nèi)標(biāo)物,，以提高定量分析的精度,。

缺點(diǎn)：

（1）內(nèi)標(biāo)法必須每個(gè)樣品中都加入內(nèi)標(biāo)物,，增加了工作量也增加了成本；

（2）在進(jìn)行多組分分析時(shí),，必須保證內(nèi)標(biāo)物有足夠的分離度,，加大了方法建立難度；

（3）作為內(nèi)標(biāo)物的要求較高,，并不容易選擇,。

3、內(nèi)標(biāo)物的選擇原則

對(duì)于內(nèi)標(biāo)法定量分析來(lái)說(shuō),，內(nèi)標(biāo)物的選擇是極其重要的,。內(nèi)標(biāo)物必須滿足如下的條件：

（1）內(nèi)標(biāo)物必須是試樣中不存在的物質(zhì)；

（2）應(yīng)當(dāng)是純凈的己知化合物,，且內(nèi)標(biāo)物和被測(cè)組分要有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如：沸點(diǎn),、極性、化學(xué)結(jié)構(gòu)等),、色譜行為和響應(yīng)特征,；

（3）必須溶于被測(cè)樣品(或溶劑)中，且不與被測(cè)樣品起化學(xué)反應(yīng)并與試樣中各組分的色譜峰能分離,；

（4）加入的內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測(cè)組分,；

（5）色譜峰的位置應(yīng)與被測(cè)組分的色譜峰的位置相近或在幾個(gè)被測(cè)組分色譜峰中間。且又不共溢出,，目的是為了避免儀器的不穩(wěn)定性所造成的靈敏度的差異,；

（6）選擇合適的內(nèi)標(biāo)物加入量，使得內(nèi)標(biāo)物和被分析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75%,，以免由于它們處在不同響應(yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差,。

三、選用案例解析

其實(shí),，內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法都是定量的一種方法,，至于哪一種方法好與不好，不能一概而論,，還是要不同情況不同分析,，我們摘取了幾個(gè)網(wǎng)友的案例，方便大家理解：

案例1

“以前做過(guò)很多醫(yī)藥,、農(nóng)藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析,，沒(méi)有自動(dòng)進(jìn)樣器，用外標(biāo)法定量,，確實(shí)重現(xiàn)性與穩(wěn)定性非常差,。

其實(shí)，仔細(xì)分析原因不一定就是外標(biāo)法不適合這種定量分析,，首先我們應(yīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室儀器和條件是否調(diào)整到了一種穩(wěn)定而合理的狀態(tài),。

比如,，襯管是否潔凈，玻璃棉的位置是否合適恰當(dāng)（能否使樣品盡可能的汽化）,，汽化溫度是否合適,，色譜峰形是否對(duì)稱（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配），附近有沒(méi)有其它色譜峰的干擾,，選用什么進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）,。

如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗(yàn)證對(duì)于精密度的要求,，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個(gè)樣品的定量結(jié)果RSD都能滿足小于1.5%的要求,，那么這個(gè)方法用外標(biāo)法就是適用的。在做過(guò)的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當(dāng)中,，有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗(yàn)證過(guò)的方法,，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（用的都是自動(dòng)進(jìn)樣），精密度都能滿足RSD小于1.5%的要求,。

當(dāng)一個(gè)方法能夠滿足測(cè)試要求的時(shí)候,，無(wú)論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的,。當(dāng)然有一個(gè)分析成本和分析時(shí)間的問(wèn)題,，內(nèi)標(biāo)的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當(dāng)然要比外標(biāo)要高和麻煩一些了,。

而有些時(shí)候,，可能受你實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器和附屬設(shè)備的影響，達(dá)不到一定的要求,，還必須進(jìn)行定量分析,，有時(shí)外標(biāo)的結(jié)果可能就要差一些。這時(shí),，你可能就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了,，可以排除手動(dòng)進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響,、包括一些未知因素平行誤差的影響,，這時(shí)內(nèi)標(biāo)可能就顯示出它的優(yōu)勢(shì)來(lái)了。”

案例2

“ 對(duì)于微量分析,，比如農(nóng)藥和獸藥殘留的分析,、環(huán)境分析等，根據(jù)不同的要求,，對(duì)于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松得多,，RSD有時(shí)可以允許達(dá)到10%甚至更高，這時(shí)可能外標(biāo)法有更大的應(yīng)用空間?！?/span>

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