超氧陰離子自由基清除能力測試試劑盒

（A002-192T 酶標(biāo)板法）

一,、 測定原理

該方法利用NADH-PMS-NBT為超氧陰離子(O₂^·-)生成系統(tǒng),，超氧陰離子清除劑能減少NBT的藍色,。通過檢測560nm處吸光值可判斷體系中還原物質(zhì)的還原能力,。

二、 試劑組成

試劑一：液體50mL×1瓶,；

試劑二：液體100μL一瓶,；

試劑三：粉劑一支；

試劑四：粉劑一支,；

試劑五：1mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,，100μL,。

三、 儲存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存6個月,。

四,、 試劑的配制

試劑二工作液：加入10mL試劑一，充分搖勻,，現(xiàn)配現(xiàn)用,，注意避光；

試劑三工作液：加入10mL試劑一,，充分搖勻,，現(xiàn)配現(xiàn)用，配好后冰上保存,，2h內(nèi)使用,；

試劑四工作液：用50mL雙蒸水溶解，搖勻后,，取1mL,，加入9mL試劑一，現(xiàn)配現(xiàn)用,，注意避光,，配好的試劑請于2小時內(nèi)用完。

試劑五：陽性對照,，按需使用,，-20℃保存。

五,、 操作步驟

充分混勻

充分混勻,，室溫避光靜置5min使之充分反應(yīng)。560nm處采用酶標(biāo)儀測定吸光值,。

¹空白管很重要,，建議做3個以上平行；

²如樣品顏色較淺可不做對照管

六,、計算公式

注：1 如未做對照孔,，可以將其視作為0；

2 陽性對照求值時將其視作測定孔進行計算即可,。

七,、注意事項

1. 如樣品中色素物質(zhì)不是分析對象，建議先通過SEP C18柱進行脫色處理,，處理后樣品可不做對照孔,；

2. 如不確定樣品的超氧陰離子自由基清除能力，可先做不同濃度的稀釋液進行摸索，并選擇適宜濃度進行測定,，高濃度下,，濃度與清除率間并不線性相關(guān)。

3. 試劑二,、三切記全程低溫操作,，尤其試劑三，長時間室溫放置或反復(fù)凍融會使其失效,。試劑四切記避光保存,，特別是配制后，需用鋁箔紙包裹,，且應(yīng)盡快用完。建議在做好一切其它準(zhǔn)備工作后再配制試劑四應(yīng)用液,。試劑四正常顏色為黃色,，強光照射下，5-10分鐘內(nèi)會變?yōu)榫G色,，隨后變?yōu)樗{色,，變色后試劑不可再用！

4. 試劑二,、三應(yīng)用液和樣品混勻后再加入試劑四,，次序顛倒會導(dǎo)致不顯色。

5. 部分物質(zhì)會導(dǎo)致顯色加深,，導(dǎo)致求得的抑制率是負值,，如遇到此類現(xiàn)象請先確定該物質(zhì)是否具有超氧陰離子清除能力，再考慮更換方法,，如鄰苯三酚自氧化法等進行測試,。