超氧陰離子自由基清除能力測試試劑盒

（A002-192T 酶標板法）

一,、 測定原理

該方法利用NADH-PMS-NBT為超氧陰離子(O₂^·-)生成系統(tǒng)，超氧陰離子清除劑能減少NBT的藍色。通過檢測560nm處吸光值可判斷體系中還原物質的還原能力,。

二,、 試劑組成

試劑一：液體50mL×1瓶；

試劑二：液體100μL一瓶,；

試劑三：粉劑一支,；

試劑四：粉劑一支；

試劑五：1mg/mL蘆丁標準品,，100μL,。

三、 儲存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存6個月,。

四,、 試劑的配制

試劑二工作液：加入10mL試劑一，充分搖勻,，現配現用,，注意避光,；

試劑三工作液：加入10mL試劑一,，充分搖勻，現配現用,，配好后冰上保存,，2h內使用；

試劑四工作液：用50mL雙蒸水溶解,，搖勻后,，取1mL，加入9mL試劑一,，現配現用,，注意避光，配好的試劑請于2小時內用完,。

試劑五：陽性對照,，按需使用，-20℃保存,。

五,、 操作步驟

充分混勻

充分混勻，室溫避光靜置5min使之充分反應,。560nm處采用酶標儀測定吸光值,。

¹空白管很重要，建議做3個以上平行,；

²如樣品顏色較淺可不做對照管

六,、計算公式

注：1 如未做對照孔，可以將其視作為0；

2 陽性對照求值時將其視作測定孔進行計算即可,。

七,、注意事項

1. 如樣品中色素物質不是分析對象，建議先通過SEP C18柱進行脫色處理,，處理后樣品可不做對照孔,；

2. 如不確定樣品的超氧陰離子自由基清除能力，可先做不同濃度的稀釋液進行摸索,，并選擇適宜濃度進行測定,，高濃度下，濃度與清除率間并不線性相關,。

3. 試劑二,、三切記全程低溫操作，尤其試劑三,，長時間室溫放置或反復凍融會使其失效,。試劑四切記避光保存，特別是配制后,，需用鋁箔紙包裹,，且應盡快用完。建議在做好一切其它準備工作后再配制試劑四應用液,。試劑四正常顏色為黃色,，強光照射下，5-10分鐘內會變?yōu)榫G色,，隨后變?yōu)樗{色,，變色后試劑不可再用！

4. 試劑二,、三應用液和樣品混勻后再加入試劑四,，次序顛倒會導致不顯色。

5. 部分物質會導致顯色加深,，導致求得的抑制率是負值,，如遇到此類現象請先確定該物質是否具有超氧陰離子清除能力，再考慮更換方法,，如鄰苯三酚自氧化法等進行測試,。