一,、菌種代碼的意義

國內(nèi)常見微生物檢驗所用的菌種代號是：

CMCC（F）或 CMCC（B）

CMCC —— 中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心

B —— 代表細菌

F ——代表真菌

大腸桿菌：CMCC (B) 44102,；

乙型副傷寒沙門桿菌：CMCC (B) 50094,；

銅綠假單胞菌：CMCC (B)10104,；

金黃色葡萄球菌：CMCC (B)26003,；

生孢梭菌：CMCC(B)64941,；

白色念珠菌：CMCC(F)98001,。

二、菌種的復(fù)蘇

按照菌種的使用說明將復(fù)蘇液在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)進行復(fù)蘇,。

三,、常用菌種保藏方法

1、瓊脂斜面低溫保存法

（1）方法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上,，按規(guī)定的溫度和時間培養(yǎng),，待充分生長后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙包好,，為減緩培養(yǎng)基的水分蒸發(fā),，延長保藏時間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞,。放在4℃左右的冰箱中保藏,。每隔 2~3個月傳代一次,。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年至一年,。

（2）適用范圍：細菌,、酵母菌、霉菌保藏,。

（3）特點：優(yōu)點是簡便,，易于推廣；一般不需要另選擇保藏用培養(yǎng)基,；對大多數(shù)微生物都適用,；缺點是保藏期太短；傳代次數(shù)多,，易發(fā)生變異及污染,。

（4）注意事項：

a.保藏的菌種應(yīng)是生命活力旺盛的新鮮培養(yǎng)物，至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物,。

b.保藏時,，破傷風(fēng)桿菌可用庖肉培養(yǎng)基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基,。必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度,、濕度以及菌種管的棉塞是否松動或生霉，如有異常應(yīng)及時處理,。

c.每次移植后,，應(yīng)與原菌種的編號、名稱逐一核對,，確證培養(yǎng)基特征和純度無誤后再繼續(xù)保藏,。

d.保藏菌種的培養(yǎng)基應(yīng)無糖，其他菌類含糖小于 2 %為宜,，以免產(chǎn)酸過多,，影響菌種存活。

e.銅綠假單胞菌在冰箱中易發(fā)生菌體自溶而死亡,，不宜用本法保存,。

2、液體石蠟保存法

（1）方法：將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~0.5 %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中,，培養(yǎng)好備用,。取化學(xué)純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15ml,，加棉塞,，瓶口包上紙，121℃高壓滅菌30min,，取出置37℃溫箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分,。

將上述液體石蠟加入培養(yǎng)好的菌種試管內(nèi),，液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基最上端1cm為宜，將試管直立,，放入4℃冰箱中保藏,。

（2）適用范圍：適用于保藏部分霉菌，酵母菌和放線菌,，對細菌保藏效果較差,。

（3）特點：本方法簡便易行，是實驗室常用的一種保藏方法,，該法主要使菌種與空氣隔絕,。

（4）注意事項：

a.保藏時，用新鮮培養(yǎng)物接種,，應(yīng)檢查純度和特征后,，方可進行保藏。

b.使用菌種時,，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一邊,，再用接種針挑取培養(yǎng)物接種到新鮮斜面上培養(yǎng)，待長出新培養(yǎng)物后,，再移種一次到新斜面上即可使用,。

c.將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒中片刻，再燒灼滅菌,，以免直接在酒精燈下燒灼時,，液體石蠟四濺，引起污染.

d.液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴格控制,，如太多,，會影響菌種交換氣體，使保藏效果不好,；如太少，斜面容易干燥,，將縮短保藏期,。一般以高出斜面1cm為宜。

e.制備無菌液體石蠟時,，每管裝量不能太多,，否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成污染。

3,、磁珠保存法

將菌液浸入素?zé)胖?/span>(或多孔玻璃珠)后再進行干燥保存的一種方法,。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠(或無水CaSO4)，上鋪玻璃棉,，再放上10~20粒磁珠,，經(jīng)干熱滅菌后,，接入菌懸液，最后冷藏,、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏,。

本法對酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌,，可保存長達兩年半時間,。

磁珠保存時間更長，使用方便,，大大減輕操作人員的工作,。

四、常用菌種保藏方法

方法一：斜面?zhèn)鞔?/span>

冰箱取出的菌種斜面,，應(yīng)在室溫放置約30分鐘,，待溫度平衡后再移入超凈工作臺或生物安全柜。

點燃酒精燈（滅菌器）,，用左手握住菌種斜面,，將管口靠進火焰旁，右手拿接種棒后端,，將接種環(huán)燒紅30秒,，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次,。左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼,，右手用無名指、小指及掌部夾住試管塞,，撥開試管塞,，將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上,，刮去少量菌苔,，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰旁,。

堵上試管塞,，左手將菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂斜面1支,，照上述操作打開試管塞,，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的低部，由底向上,，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動,，使細菌劃在斜面的表面上。

取出接種棒,，在火焰旁將試管塞堵上,，然后將接種棒在火焰上燒灼滅菌,。

將已接種完的斜面置35~37℃培養(yǎng)22~24小時，霉菌管一般置20~25℃霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7日,。取出后放人冰箱保存,，一般 3個月轉(zhuǎn)種一次。

 方法二：斜面-營養(yǎng)肉湯-分離平板-斜面

用接種環(huán)取上述斜面菌苔少許接種置營養(yǎng)肉湯中(5ml/支,，已滅菌),，置35~37℃培養(yǎng)18~24小時后，再用接種環(huán)取培養(yǎng)好的營養(yǎng)肉湯菌懸液,，接種于分離平板,，置35~37℃培養(yǎng)18~24小時，用接種針選典型菌落劃線于營養(yǎng)瓊脂斜面,，置35~37℃培養(yǎng)18~24小時,。一般同時接種幾支管，其中一支用于以后菌種傳代或接種到半固體瓊脂培養(yǎng)基中,，其它用做工作菌種,。

常用分離平板：

大腸埃希菌——EMB瓊脂平板；

銅綠假單胞菌——溴化十六烷三甲銨瓊脂培養(yǎng)基,；

金黃色葡萄球菌——甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基,。

五、菌種保管

菌種保管應(yīng)有專人負責(zé),，雙人雙鎖,，確保菌種安全。

菌種領(lǐng)用,、傳代,、保存都要有記錄，包括名稱,、入庫,、領(lǐng)用、傳代日期,、鑒定者,、主要鑒定性能及滅活或銷毀情況。

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