細(xì)胞因子在免疫細(xì)胞功能評估時有著不可替代的作用,，然而這些關(guān)鍵分子在體外誘導(dǎo)及檢測時卻異常“嬌氣”,，操作細(xì)節(jié)稍有不慎，實驗結(jié)果就會南轅北轍。你是否也因此而頭疼,？今天Elabscienc化身細(xì)節(jié)控的救星，從實驗原理到閉坑指南，助你逐一拆解,，告別無效實驗！

一、 為什么需要進行細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)表達和檢測

細(xì)胞因子是一類由免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞分泌的小分子蛋白,，通過動態(tài)平衡的網(wǎng)絡(luò)形式,，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)以及組織修復(fù)等重要生物過程,。例如,，M1型巨噬細(xì)胞分泌促炎性細(xì)胞因子（如TNF-α、IL-1α,、IL-6等）,，以推動炎癥反應(yīng)，但持續(xù)的炎癥也可能導(dǎo)致組織損傷,。而M2型巨噬細(xì)胞則通過分泌抑炎性細(xì)胞因子（如IL-10,、TGF-β）以及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），減輕炎癥并促進修復(fù),。因此,，細(xì)胞因子在評估免疫細(xì)胞功能時具有不可替代的作用。

由于細(xì)胞因子為分泌性蛋白,，其在細(xì)胞胞內(nèi)的含量通常較低,，無法通過流式細(xì)胞術(shù)直接檢測，此時需要將目的細(xì)胞分選后在體外進行刺激阻斷后才能進行檢測,。此外,，為了驗證特定基因或處理方式（如給藥、抑制劑處理等）對目的細(xì)胞的影響,，需要在體外進行誘導(dǎo)處理使其成為特定的細(xì)胞亞群,，如誘導(dǎo)Th1/Th2/Th17細(xì)胞或M1/M2型巨噬細(xì)胞等，此時細(xì)胞因子的誘導(dǎo)表達和檢測尤為重要,。

二,、 進行細(xì)胞因子的體外誘導(dǎo)和檢測時，需要注意哪些細(xì)節(jié)

雖然多數(shù)常用細(xì)胞因子模型的體外誘導(dǎo)模型容易在文獻中搜索得到,，但在實際操作過程中可能復(fù)現(xiàn)結(jié)果并不理想,。基于Elabscience®在細(xì)胞因子誘導(dǎo)及檢測實驗中的經(jīng)驗,，小E老師為大家總結(jié)以下幾點可能的影響因素：

1,、細(xì)胞的活性：某些細(xì)胞（如NK細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞）的活性易受環(huán)境的影響,，因此需要更輕柔地處理細(xì)胞,，盡量避免對細(xì)胞的損傷。在進行下游誘導(dǎo)表達前,，建議進行細(xì)胞活性檢測或去除死細(xì)胞,，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,；

2、細(xì)胞亞群間的相互影響：不同細(xì)胞亞群之間可能存在相互抑制或轉(zhuǎn)化現(xiàn)象,，例如TH1與TH2細(xì)胞之間相互抑制,、M2型巨噬細(xì)胞可能向M1型轉(zhuǎn)化。因此在選用誘導(dǎo)細(xì)胞時需要特別注意,，如誘導(dǎo)Th2細(xì)胞時,，選用初始CD4 T細(xì)胞的效果比總CD4 T細(xì)胞的效果更好，因為能夠排除Th1的影響,；

3,、誘導(dǎo)試劑的活性：不同廠家的同一誘導(dǎo)試劑可能存在純度和活性差異，需要提前確認(rèn)相關(guān)信息,，選用純度和活性更高的試劑,。同時，部分試劑無法反復(fù)凍融,、或溶解后活性下降快或容易吸附,，因此需特別注意保存條件，盡量分裝保存,，并盡快使用,；

4、刺激阻斷的影響：在進行細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子檢測時,，常用刺激阻斷劑進行處理,。部分細(xì)胞因子對刺激阻斷的處理敏感，處理后檢測效果可能降低（如圖1）,。因此,，在使用刺激阻斷劑前，應(yīng)確認(rèn)其是否為必須操作,，并優(yōu)化處理時間,；

圖1. 刺激阻斷對CD4 T細(xì)胞中IL-3檢測的影響

使用磁性分選試劑盒EasySort™ Mouse CD4+T Cell Isolation Kit（MIM002N）分選小鼠CD4 T細(xì)胞后使用Mouse CD3/CD28 T Cell Activation Beads（MIM001A）激活T細(xì)胞并同時加入IL-2和IL-4進行培養(yǎng)，5天后直接檢測細(xì)胞中IL-3的表達（左圖）和刺激阻斷后檢測細(xì)胞中IL-3的表達（右圖）,。

三,、 Elabscience®細(xì)胞鑒定試劑盒

在前文的實驗細(xì)節(jié)中，無論是細(xì)胞活性波動,、亞群相互干擾,，還是試劑穩(wěn)定性不足，都可能成為實驗結(jié)果的“隱形殺手”,。 為了解決廣大科研er在細(xì)胞模型構(gòu)建中遇到的問題,，Elabscience®可提供細(xì)胞鑒定試劑盒系列產(chǎn)品，試劑盒包含分化誘導(dǎo)試劑和鑒定試劑,，產(chǎn)品性能優(yōu)異,，結(jié)果重復(fù)性佳：

以上就是本期細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)表達及檢測的所有內(nèi)容了,，如有相關(guān)問題,，歡迎小伙伴們在后臺留言或在線聯(lián)系我們,，我們將及時解答！