一,、平板劃線

平板劃線的操作是為了將菌稀釋從而獲得純培養(yǎng)的單菌落,。劃線有多種方式,。

1,、三區(qū)平板劃線

三區(qū)劃線中區(qū)所占的區(qū)域大約是平板面積的五分之一到四分之一,。第二區(qū)搭過區(qū)的面積使微生物數(shù)量得到“稀釋”，第三區(qū)搭過第二區(qū)的面積使微生物數(shù)量進一步“稀釋”,，第三區(qū)不可與區(qū)有重疊的劃線,。一般適用于可疑菌落的分離，或可疑菌落的二次平板分離,。通常劃完三區(qū)后就可以出現(xiàn)單菌落,。

2、四區(qū)平板劃線

四區(qū)平板劃線與上面的三區(qū)劃線類似,，只是每一區(qū)的劃線面積相應減小,，同樣第三區(qū)不可與區(qū)相重疊，第四區(qū)不可與第二區(qū)和區(qū)相重疊,，四區(qū)劃線比三區(qū)劃線多稀釋一次,，這樣通過增加劃線區(qū)域，有可能會分離到更多更純的單菌落,。

3,、單次連續(xù)“之”字平板劃線

其實在微生物劃線接種中，無論是試管斜面劃線接種還是平板劃線接種,，都會用到“之”字劃線,。“之”字劃線的要領是：往復不間斷劃線,，但是又不與劃過的路線重復或重疊,。如果菌量比較大，就可以劃得更為密集或者增加一塊平板繼續(xù)“之”字劃線（即連續(xù)劃兩塊板）,?！爸弊謩澗€一般適用于分離本身在此培養(yǎng)基上單一且黏性較大的菌類或可疑菌落的純培養(yǎng)。

4,、網狀平板劃線

網狀平板花線,，其實就是兩次方向垂直的“之”字劃線重疊在一起，一般用于純培養(yǎng),，目的是通過增加更多的劃線路徑來獲得更多的純培養(yǎng)物,，特別是針對一些生長較慢或菌落非常細小的菌類,。

在以上的這些平板劃線的方式中，三區(qū)平板劃線的是分區(qū)劃線法,，詳細操作步驟如下：

①將接種環(huán)放在火焰上灼燒,，直到接種還環(huán)燒紅。

②在火焰旁冷卻接種換環(huán),，打開試管塞。

③將試管口通過火焰,，旋轉試管口并小幅度來回移動試管,，切不可長時間讓試管口停滯于火焰上加熱。

④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中,，挑取一環(huán)菌液,。

⑤將試管口通過火焰幾次后，塞上試管塞,。將試管放回試管架,。

⑥左手拿起培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿蓋打開一條縫隙,，右手將沾有菌液的接種環(huán)迅速深入平皿內,。從平皿邊緣開始“之”字劃線（基準線也稱區(qū)域），大約劃過平皿的五分之一到四分之一左右的面積,。關閉培養(yǎng)皿蓋,，將培養(yǎng)皿調轉大約120°。再次灼燒接種環(huán),，將接種環(huán)在空氣中或靠在培養(yǎng)皿蓋內側冷卻后從區(qū)域末端開始往第二區(qū)內劃線,。兩個區(qū)域劃線的交角大約是120°。重復以上動作,，完成第三區(qū)（甚至第四區(qū)）劃線操作,。注意：當前操作的劃線只能與相鄰前一區(qū)域相交，絕不能與其他區(qū)域的劃線有重疊,。

一般三區(qū)劃線就能分離出單菌落,，理想的三區(qū)分區(qū)劃線平板培養(yǎng)后的結果見下圖。區(qū)和第二區(qū)前部的細菌生長成“直線”,，第二區(qū)后部的細菌生長呈“虛線”,。第三區(qū)呈“虛線”和離散的“小點”（即單菌落）。

二,、平板傾注

平板傾注接種的步驟具體操作如下：

1,、先在酒精燈火焰旁打開無菌空平皿，注意開啟幅度不宜過大,，加入一定量的樣液,。

2、按“倒平板”的步驟加入培養(yǎng)基（注意培養(yǎng)基要水浴保溫在46°左右，溫度太低,，培養(yǎng)基容易凝固,，溫度太高容易燙傷細菌）。

3,、將平皿蓋上蓋,。在桌面劃圓圈滑動，幅度不要太大以免培養(yǎng)基灑漏或濺到平皿皿蓋,?；旌暇鶆蚝螅瑢⑵矫笾糜谧烂?，待平皿凝固后,，翻轉平皿堆疊放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。有時還會在凝固的培養(yǎng)基表面再倒一層培養(yǎng)基,，防止蔓延菌落的出現(xiàn),。

三、平板涂布

平板涂布是將少量（通常0.2mL~0.5mL）系列稀釋的菌液涂布在預先傾注好的固體培養(yǎng)基上,，靠涂布棒在瓊脂表面均勻鋪開,，培養(yǎng)后獲得菌落個數(shù)的一種計數(shù)技術。

平板涂布的操作如下：

1,、無菌移取一定量樣液于平皿固體培養(yǎng)基,。

2、玻璃涂布棒蘸取酒精,。注意始終保持涂布棒的涂布一端向下,，并且涂布棒上的酒精既要覆蓋全部即將深入平皿的部位又不能滴淌。

3,、通過酒精燈火焰點燃,。一定注意防止酒精倒流或濺溢引燃物品或燒到手。

4,、左手將皿蓋在酒精燈火焰旁邊打開一個縫隙,，右手將灼燒過的涂布棒涂布一端靠在皿蓋上冷卻。冷卻后將平皿蓋開大一些,，用涂布棒刮樣液在培養(yǎng)基表面均勻涂布開,。涂布的時候，涂布棒不能觸碰平皿內側邊緣,。如果有條件,，涂布過程應將平皿置于旋轉的涂布臺上。

5,、涂布棒再次蘸取酒精,，通過火焰點燃滅菌,。

6、待平皿表面液體晾干后,，翻轉平皿,，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

北京百歐博偉生物技術有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng),，超低溫冰箱,，生物安全柜等儀器設備可進行對微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實驗研究,。對我國生命科學研究,、生物技術創(chuàng)新和產業(yè)發(fā)展的需求進行積極的面對社會乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護知識產權的前提下,，為工農業(yè)生產、衛(wèi)生健康,、環(huán)境保護,、科研教育提供微生物物種資源、基因資源,、信息資源和專業(yè)技術服務,。

除此之外，我們還擁有對菌種,、細胞,、培養(yǎng)基、配套試劑等產品需求者的極優(yōu)質服務,，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位,，都有相關人士進行維護,確保您在微生物菌種查詢網中獲得優(yōu)質服務！也正因為此,，北京百歐博偉生物技術有限公司與國內外多家研制單位,、生物制藥、第三方檢測機構和科研院所院校,、化工企業(yè)有著良好,、長期和穩(wěn)定的合作關系！