1、如何進(jìn)行色譜柱的維護(hù),？

①建議檢測前樣品和流動相進(jìn)行過濾,。

②建議每天做完樣品后及時進(jìn)行清洗。

③常規(guī)檢測：測試完后直接把色譜柱反向連接采用90%有機(jī)相沖洗45min,，最后保存在純甲醇或純乙腈中,。

④使用緩沖鹽條件：

a等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min。

b梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min,。

注意：

過渡流動相是指有機(jī)相和水相比例與分析流動相相同比例,，只是不含有緩沖鹽,。

緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機(jī)相反向沖洗60min,，最后保存在純有機(jī)溶劑中,。

注意：

使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜。

2,、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時,，很傷柱子，如使用一段時間后,，柱效降低,，峰形改變，如何恢復(fù),？

答：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨),，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。

3,、液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么,？

①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子,，替換篩板或更換柱子,。

②存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子,，改換流動相或更換選擇性好的柱子,。

③可能柱超載，減少進(jìn)樣量,。

4,、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？

①樣品量不足,，解決辦法為增加樣品量,。

②樣品未從柱子中流出，可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子,。

③樣品與檢測器不匹配,，根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器。

④檢測器衰減太多,，調(diào)整衰減即可,。

⑤檢測器時間常數(shù)太大，解決辦法為降低時間參數(shù),。

⑥檢測器池窗污染,，解決辦法為清洗池窗。

⑦檢測池中有氣泡,，解決辦法為排氣,。

⑧記錄儀測壓范圍不當(dāng),，調(diào)整電壓范圍即可。

⑨流動相流量不合適,，調(diào)整流速即可,。

⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線，解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,，重作校正曲線,。

5、做HPLC分析時,，柱壓不穩(wěn)定,，原因何在？如何解決,？

①泵內(nèi)有空氣,，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理,。

②比例閥失效,，更換比例閥即可,。

③泵密封墊損壞,，更換密封墊即可。

④溶劑中的氣泡,，解決的辦法是對溶劑脫氣,，必要時改變脫氣方法。

⑤系統(tǒng)檢漏,，找出漏點(diǎn),，密封即可。

⑥梯度洗脫,，這時壓力波動是正常的,。

6、HPLC柱驗(yàn)收測試時柱壓過高,，請問為什么,？

柱壓過高是HPLC柱用戶碰到的問題。其原因有多方面,，而且常常并不是柱子本身的問題,，您可按下面步驟檢查問題的起因：

①拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高,，否則是保護(hù)柱的問題,，若柱壓仍高，再檢查,。

②把色譜柱從儀器上取下,，看壓力是否下降,，否則是管路堵塞，需清洗,，若壓力下降,，再檢查。

③將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上,，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動池）,。這時,，如果柱壓仍不下降，再檢查,。只用于使用過的柱子,。

④更換柱子入口篩板，若柱壓下降,，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,，請與廠商聯(lián)系,。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題,。

7,、為何出現(xiàn)峰展寬？

①樣品體積過大：用流動相配樣,，總的樣品體積小于峰的15%,。

②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展:進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散。

③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn),。

④流動相粘度過高:增加柱溫,，采用低粘度流動相。

⑤檢測池體積過大:用小體積池,，卸下熱交換器,。

⑥保留時間過長:等度洗脫時增加強(qiáng)溶劑含量，也可用梯度洗脫,。

⑦柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至最小,。

⑧樣品過載:進(jìn)小濃度小體積樣品。

8,、流動相出現(xiàn)氣泡的原因有哪些,？

①流動相溶液中往往因溶解有氧氣或空氣而形成氣泡。

②液路阻力比較大，吸液時出現(xiàn)了真空氣泡,。

③系統(tǒng)開始工作時未能將流路中的空氣排除干凈,。

④在注入樣品時混入了空氣。

9,、常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些,？

①加熱回流脫氣，脫氣,，但無法保持,。

②氦脫氣，此方法脫氣效果佳,，能除去百分之九十以上的空氣,，但氦氣價格太貴，所以用的不多,。

③真空脫氣,，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失,。

④超聲脫氣,，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中,。目前還是盡量爭取用在線脫氣,，方便且效果好。

10,、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時,，很傷柱子,，如使用一段時間后,，柱效降低，峰形改變,，如何恢復(fù),？

答：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％,。

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