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精品推薦 | 極速體驗(yàn)！Superfast-BS轉(zhuǎn)化，半小時(shí)輕松搞定~
隨著分子檢測(cè)的不斷發(fā)展，甲基化qPCR檢測(cè)以及甲基化NGS檢測(cè)已成為非常普及的檢測(cè)技術(shù),，這兩種技術(shù)的必經(jīng)之路就是甲基化轉(zhuǎn)化，甲基化轉(zhuǎn)化從方法學(xué)上可分為亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和酶法轉(zhuǎn)化,，近幾年,，基于DNA甲基化位點(diǎn)的檢測(cè)試劑盒陸續(xù)獲批面世。NMPA批準(zhǔn)的甲基化檢測(cè)試劑盒大部分為熒光PCR法,，主要原因在于熒光PCR法操作簡(jiǎn)便,，無需在PCR后電泳，且具有靈敏度高,、特異性強(qiáng),、重復(fù)性好等特點(diǎn)。這些甲基化檢測(cè)試劑采用的轉(zhuǎn)化方法為亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化法,，亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化成為DNA甲基化檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”,。但是傳統(tǒng)的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化有很多局限性，例如過長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化時(shí)間,、嚴(yán)重的DNA損傷,、被高估的5mC水平、C-U轉(zhuǎn)化不全等,。
圖1.亞硫酸氫鹽催化C轉(zhuǎn)化為U的化學(xué)反應(yīng)概要
甲基化檢測(cè)技術(shù)在疾病早篩領(lǐng)域持續(xù)火爆,，2024-2025 年獲國(guó)家藥監(jiān)局最新批準(zhǔn)的甲基化檢測(cè)試劑盒如下：
思博士 ® MT-1A、Epo 及 Septin9 基因甲基化檢測(cè)試劑盒（PCR 熒光探針法）2：2024 年 8 月 7 日獲批（國(guó)械注準(zhǔn) 20243401386）,，由博爾誠(chéng)（北京）科技有限公司自主研發(fā),，是 NMPA 批準(zhǔn)上市的食管癌血液基因甲基化檢測(cè)產(chǎn)品，可通過測(cè)定外周血中腫瘤 DNA 特定位點(diǎn)（MT-1A,、Epo 及 Septin9 基因）的甲基化程度,，僅需 5ml 外周血即可實(shí)現(xiàn)食管癌的高效精準(zhǔn)檢出。
人 CDO1 和 CELF4 基因甲基化檢測(cè)試劑盒（PCR - 熒光探針法）10：2024 年 12 月 17 日獲批（國(guó)械注準(zhǔn) 20243402610）,，由北京起源聚禾生物科技有限公司研發(fā),，用于體外定性檢測(cè)人宮頸脫落細(xì)胞 DNA 中 CDO1 和 CELF4 基因的甲基化水平。
艾思寧 ®——KCNA3 和 OTOP2 基因甲基化聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）：2025 年 1 月 21 日獲批（國(guó)械注準(zhǔn) 20253400207）,，由武漢艾米森自主研發(fā),，基于實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，通過檢測(cè)血液 ctDNA 中的 OTOP2 和 KCNA3 基因甲基化程度實(shí)現(xiàn)對(duì)食管癌的早期檢測(cè),。
人 Twist1/Vimentin 基因甲基化檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）：2025 年 1 月獲批（國(guó)械注準(zhǔn) 20253400083）,，由江蘇為真生物醫(yī)藥技術(shù)股份有限公司研發(fā),，針對(duì)癌種為尿路上皮癌。
GNB4 和 Riplet 基因甲基化聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）：2025 年 1 月獲批（國(guó)械注準(zhǔn) 20253400101）,，由武漢艾米森生命科技有限公司研發(fā),，針對(duì)癌種為肝癌。
人類 Septin9,、SDC2 和 NDRG4 基因甲基化檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）6：2025 年 3 月 6 日獲批（國(guó)械注準(zhǔn) 20253400481）,，由江蘇健為診斷科技有限公司研發(fā)，用于體外定性檢測(cè)人糞便樣本 DNA 中 Septin9,、SDC2 和 NDRG4 基因的甲基化狀態(tài),，對(duì)判斷患者結(jié)直腸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行輔助診斷。
人 CDO1/AJAP1/GALR1 基因甲基化檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）1：2025 年獲批,，由武漢凱德維斯生物技術(shù)有限公司研發(fā),，對(duì)人宮腔脫落細(xì)胞樣本中基因甲基化狀態(tài)進(jìn)行定性檢測(cè)，用于疑似子宮內(nèi)膜癌患者的輔助診斷,。
2024年1月2日,，芝加哥大學(xué)何川教授團(tuán)隊(duì)在Nature Biotechnology上在線發(fā)表了題為Ultrafast bisulfite sequencing detection of 5?methylcytosine in DNA and RNA的研究論文，該研究提出并開發(fā)了對(duì)DNA和RNA上的5-甲基胞嘧啶修飾進(jìn)行快速,，準(zhǔn)確檢測(cè)的測(cè)序方法,，簡(jiǎn)稱為UBS-seq。該技術(shù)比現(xiàn)有的轉(zhuǎn)化反應(yīng)過程加速20-30倍,，同時(shí)明顯的降低了DNA損傷,，以及C-U轉(zhuǎn)化不che底導(dǎo)致的背景干擾。
圖2.UBS-seq法在微量樣本中應(yīng)用,，傳統(tǒng)BS轉(zhuǎn)化相比有更低的背景噪音
傳統(tǒng)BS轉(zhuǎn)化的不足之處和Superfast BS-seq的優(yōu)勢(shì)有哪些呢,？
傳統(tǒng)BS-seq:
轉(zhuǎn)化液濃度低，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),，約3 h,；
在高 GC DNA 區(qū)域轉(zhuǎn)化不充分；
DNA降解嚴(yán)重,；
非甲基化區(qū)域優(yōu)先降解,。
Superfast BS-seq
轉(zhuǎn)化液濃度高，轉(zhuǎn)化時(shí)間短,，約5min；
DNA降解程度低,，轉(zhuǎn)化后樣本完整度好,；
GC區(qū)域轉(zhuǎn)化率高，假陽(yáng)性率低,。
翌圣生物的Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（柱式：12225ES）和Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（磁珠法：12227ES）便是基于此技術(shù)開發(fā)優(yōu)化而成,，可以在98°C 5min條件下可完成＞99.5%的胞嘧啶轉(zhuǎn)化,，并且極大的降低了DNA損傷，更好的保證了DNA片段的完整性,，約30 min可完成BS轉(zhuǎn)化全流程,，轉(zhuǎn)化后的產(chǎn)物適用于PCR擴(kuò)增和DNA測(cè)序等下游應(yīng)用。
實(shí)驗(yàn)流程
圖3.Superfast BS轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)流程
產(chǎn)品亮點(diǎn)
產(chǎn)品亮點(diǎn)一：
優(yōu)異的轉(zhuǎn)化率
投入不用量的293gDNA,，293gDNA參入0.5% λ DNA,，使用12227（磁珠法）與競(jìng)品1轉(zhuǎn)化試劑盒進(jìn)行頭對(duì)頭對(duì)比，同時(shí)采用雙鏈甲基化DNA建庫(kù)（12214ES）,，如圖4所示：12227（磁珠法）對(duì)不同投入量的DNA中 λ DNA C的轉(zhuǎn)化率≥99.5%,，轉(zhuǎn)化時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)，能進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)化效率,。
圖4.12227和競(jìng)品的轉(zhuǎn)化率
產(chǎn)品亮點(diǎn)二：優(yōu)異的樣本兼容率
10 ng cf DNA和50 ng FFPE DNA,，cf DNA和FFPE DNA都參入0.5% λ DNA，使用12227（磁珠法）與競(jìng)品1轉(zhuǎn)化試劑盒進(jìn)行頭對(duì)頭對(duì)比,，同時(shí)采用雙鏈甲基化DNA建庫(kù)（12214ES）,，如圖5所示：12227（磁珠法）對(duì)不同樣本中 λ DNA C的轉(zhuǎn)化率≥99.5%，轉(zhuǎn)化時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng),，能進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)化效率,。
圖5
產(chǎn)品亮點(diǎn)三：
優(yōu)異的回收率
投入不同量的293 DNA，使用12225和12227與競(jìng)品1轉(zhuǎn)化試劑盒進(jìn)行頭對(duì)頭對(duì)比,，轉(zhuǎn)化后采用Qubit ssDNA定量,，計(jì)算回收率，如圖6所示：12225的樣本回收率能穩(wěn)定達(dá)到60%以上,，并且當(dāng)樣本量大于200 ng,，回收率能超過70%，磁珠法轉(zhuǎn)化試劑在高投入量下,，回收率略低于柱式法,，1 μg以內(nèi)，磁珠法的回收率能達(dá)到60%,。
圖6.競(jìng)品1為磁珠法
產(chǎn)品亮點(diǎn)四：適用于單細(xì)胞甲基化建庫(kù)
在微流控的自動(dòng)化單細(xì)胞DNA甲基化平臺(tái)上,，進(jìn)行單細(xì)胞甲基化轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，樣本中單細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)化率在99%左右,。
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒（柱式） | 12225ES |
Hieff® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒（磁珠法） | 12227ES |
翌圣DNA甲基化解決方案
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