BACE1抑制劑(Verubecestat)操作規(guī)程：

1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,，需根據(jù)細(xì)胞的大小,，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2,、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物,。

3、將96孔板在37℃,，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間,。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。

5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時,，使MTT 還原為甲臜,。

6、吸出上清液,，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,，用平板搖床搖勻。

7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片,，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8,、結(jié)果分析

a,、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,，無細(xì)胞）,，各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值,，C 為對照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)