一,、要樹立科學(xué)必須真實(shí)的觀念,，實(shí)驗(yàn)態(tài)度要端正,。

要懷著一顆為了出具真實(shí),、準(zhǔn)確,，可信數(shù)據(jù)而敬畏的心去申請能力驗(yàn)證,。

實(shí)驗(yàn)要求科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn),實(shí)驗(yàn)要預(yù)先充分練習(xí)和實(shí)踐,。能力驗(yàn)證是對實(shí)驗(yàn)室綜合實(shí)驗(yàn)水平（人員，設(shè)備,，環(huán)境等多因素）的評價,。

首先要選好實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，找到與之配套的方法,，進(jìn)行充分的方法驗(yàn)證,，從檢測員能力，儀器設(shè)備性能,，校檢結(jié)果是否能滿足實(shí)驗(yàn)需要,，實(shí)驗(yàn)檢測多次實(shí)驗(yàn)，檢測環(huán)境是否進(jìn)行了充分的考慮,，實(shí)驗(yàn)確認(rèn)好實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,，認(rèn)真學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn),，理解標(biāo)準(zhǔn)，并做到標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)范的步驟,，并對自己實(shí)驗(yàn)有了一定的信心后再去申請能力驗(yàn)證為宜,。

舉例：某實(shí)驗(yàn)室未經(jīng)過充分實(shí)驗(yàn)方法確認(rèn)，實(shí)驗(yàn)平時做的也少,，直接申請了能力驗(yàn)證,。實(shí)驗(yàn)過程生疏，照方抓藥,，手忙腳亂,，造成稀釋梯度不夠，平板干燥,，菌落蔓延,，無法出具具體數(shù)值，實(shí)驗(yàn)失敗,。

二,、實(shí)驗(yàn)室收到盲樣菌株標(biāo)本后，首先應(yīng)做的事情,。

1,、檢查標(biāo)本的性狀和確認(rèn)包裝情況，然后按照要求去能力驗(yàn)證網(wǎng)站提交收到樣品情況,。

2,、仔細(xì)閱讀參指導(dǎo)書，包括標(biāo)本如何保存的信息,，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部工作分配,，明確工作任務(wù)和要求。

3,、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書的要求制訂檢驗(yàn)流程,，認(rèn)真做好準(zhǔn)備工作，包括實(shí)驗(yàn)中需要使用的器皿,，須提前做好清潔滅菌,。

三、能力驗(yàn)證樣品處理,。

1,、定量項(xiàng)目，西林瓶內(nèi)樣品不可分割,，應(yīng)全部用于檢測,。一般參考書指導(dǎo)的是加40mL稀釋液制成40mL樣品。

2、定量項(xiàng)目樣品稀釋,。指導(dǎo)書標(biāo)明了稀釋范圍的,，在稀釋范圍左右各加1個稀釋度進(jìn)行；書上沒有稀釋范圍的,，多做稀釋倍數(shù),，選擇合適的稀釋倍數(shù)計(jì)數(shù)（一般可稀釋至10-8）。

3,、定量項(xiàng)目,，除了要多做稀釋倍數(shù)外，同時同一稀釋度要多倒幾皿,，從原理上來講,，檢測過程屬于隨機(jī)抽樣檢查，平板越多,，數(shù)據(jù)越接近真值,。考慮性價比,，又不可能一直一個稀釋度很多平板,，所以能力驗(yàn)證時候多倒幾皿，求好結(jié)果,。

4,、定性項(xiàng)目有一些重要步驟。

a,、增菌及分離步驟尤其重要,。選擇合適的增菌液和分離用培養(yǎng)基對目標(biāo)菌的檢出非常關(guān)鍵，選擇兩種以上的增菌液和分離用培養(yǎng)基對菌株作直接分離和增菌后分離,。

b,、劃線分離十分重要，要把增菌液中的目標(biāo)菌盡量多的表達(dá)出來,，要分出單個菌落并盡可能多挑取可疑菌落,，確保分離到目標(biāo)菌,。

c,、生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)以營養(yǎng)瓊脂平板上的純培養(yǎng)細(xì)菌為好。

四,、實(shí)驗(yàn)過程一定要做陰陽對照,，全程空白對照。

再厲害的高手也有失手和看走眼的時候,，所以陰陽對照就是一面鏡子,。對于一些熒光染色后進(jìn)行判讀的實(shí)驗(yàn)顯得尤為重要。

這里掃盲一個誤區(qū)，定量計(jì)數(shù)測菌數(shù)時,，我們會認(rèn)為空白就是直接取1mL無菌水然后加入到平板里,，然后混菌倒皿，這是錯誤的,。因?yàn)檫@樣做的話,，只能模擬證明稀釋后倒平板這一步有沒有污染。而無法證明從樣品稱取-樣品稀釋時候的污染質(zhì)控情況,。所以要做全程空白對照,。

全程空白的含義就是把無菌液當(dāng)成樣品，然后走一遍實(shí)驗(yàn)過程,。如果嚴(yán)格這么做的話,，又會走向另一個，所以全程空白只從取樣開始至稀釋10-1做了簡化,，而不做后續(xù)稀釋空白樣的混菌實(shí)驗(yàn),。

在有些其他實(shí)驗(yàn)時候，會有樣品空白以及稀釋液空白,，比如大氣環(huán)境NOx和SO2的檢測,，有興趣的可以去看看，對于全程空白的意義理解有更好的幫助,。

五,、培養(yǎng)基方面需要注意的地方。

1,、培養(yǎng)基配制充分混勻后再滅菌,。

正確做法是用一部分水?dāng)嚢杈鶆蚝螅偌尤胧Ｓ嗨?，混勻后滅菌或分裝,。

2、混菌法倒皿要充分混勻,。

培養(yǎng)基倒完要左5圈右5圈（混勻速度一定要慢,，目的是——避免培養(yǎng)基波動到二皿接觸的縫隙部分造成后續(xù)污染），找較水平位置冷卻凝固,。

3,、培養(yǎng)基要不要覆蓋問題。

覆蓋的目的是為了阻止活菌在培養(yǎng)基表層通過鞭毛移動,，造成片狀生長,，無法計(jì)數(shù)這一不利現(xiàn)象的發(fā)生。這里可以發(fā)揮主觀能動性-對于不運(yùn)動的菌,，可以不覆蓋,，對于運(yùn)動的菌覆蓋,。

總結(jié)一下：

a長期檢測同一種樣品，不覆蓋并無蔓延現(xiàn)象,，不覆蓋,；長期檢測蔓延選擇了覆蓋，一直覆蓋,。

b未知樣品,，進(jìn)行覆蓋和不覆蓋的比對實(shí)驗(yàn)，然后決定以后同樣的樣品是否需要覆蓋,。養(yǎng)成經(jīng)驗(yàn),。

c能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，覆蓋和不覆蓋的都做,，不要吝惜那么一點(diǎn)點(diǎn)培養(yǎng)基或耗材,，畢竟能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)做的漂亮才是實(shí)驗(yàn)室（是室而不是人！）能力的綜合體現(xiàn),。

4,、培養(yǎng)過程防止平皿干燥。

培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基可以倒的適當(dāng)厚一些,，比如25mL,。培養(yǎng)箱底部接一個不銹鋼盆，裝上足量無菌水（沒有就去買幾瓶哇哈哈怡寶什么的水倒里面）,。

5,、培養(yǎng)完成要保留實(shí)驗(yàn)平皿和其他相關(guān)材料。

作為能力驗(yàn)證,，原始記錄及實(shí)驗(yàn)報告還沒出具完成,，各種材料還是保留至數(shù)據(jù)出具后較好，便于出現(xiàn)問題現(xiàn)查原因,，馬上補(bǔ)救,。

題外話：很多檢測員等結(jié)果出了問題然后到網(wǎng)絡(luò)上來求救，結(jié)果一問平皿已經(jīng)洗掉了,，那就不知道是什么狀況了,。有時候你問她她還會振振有詞的講：10-1，10-2都蔓延了,，不洗掉干嘛,，10-5，10-6沒長菌,，不洗掉干嘛,？我當(dāng)時真的無語,，也不想多說話就沒繼續(xù)講了?，F(xiàn)在我回答一下這個問題：我要你一套完整梯度濃度的平皿,，可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩(wěn)定，還有蔓延是個什么狀況,，到底有多少,，是一片還是局部還是很小一部分，然后根據(jù)整體數(shù)據(jù)估算結(jié)果（當(dāng)然實(shí)驗(yàn)做成這樣也基本算失敗了,，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)沒有做到你可控的范圍）,，是補(bǔ)救的一種（并不可取，屬于垂死掙扎）,。定量實(shí)驗(yàn)時,，當(dāng)天做完的稀釋樣品也要放冰箱里，雖然實(shí)驗(yàn)要求不能復(fù)檢或重復(fù)檢測,，但作為微生物專業(yè)你是知道菌放在2-8℃下并不會長多少,，如果第二天一看數(shù)據(jù)有蔓延或疑問，馬上再做一次,，這樣也應(yīng)該在誤差范圍內(nèi)出數(shù),。

6、實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程勤觀察,。

微生物培養(yǎng)過程一般需要幾小時到幾十小時,，要利用這段時間觀察培養(yǎng)箱及菌生長情況，比如溫度是否穩(wěn)定,，培養(yǎng)室內(nèi)濕度如何等等,，多思多看，準(zhǔn)備預(yù)案,。方有可能得到與盲樣一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

原始記錄應(yīng)有條理、思路清晰,完整準(zhǔn)確地記錄菌株鑒定檢驗(yàn)的全過程,原始記錄要包含時間,、試驗(yàn)現(xiàn)象,、試驗(yàn)結(jié)果三個要素，方便試驗(yàn)出現(xiàn)問題的查找,。

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