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微生物實(shí)驗(yàn)檢測的能力驗(yàn)證和能力考核要點(diǎn),!

來源:北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司   2025年03月17日 15:47  

一,、要樹立科學(xué)必須真實(shí)的觀念,,實(shí)驗(yàn)態(tài)度要端正,。

 

要懷著一顆為了出具真實(shí),、準(zhǔn)確,,可信數(shù)據(jù)而敬畏的心去申請能力驗(yàn)證,。

 

實(shí)驗(yàn)要求科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn),實(shí)驗(yàn)要預(yù)先充分練習(xí)和實(shí)踐,。能力驗(yàn)證是對實(shí)驗(yàn)室綜合實(shí)驗(yàn)水平(人員,設(shè)備,,環(huán)境等多因素)的評價,。

 

首先要選好實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,找到與之配套的方法,,進(jìn)行充分的方法驗(yàn)證,,從檢測員能力,儀器設(shè)備性能,,校檢結(jié)果是否能滿足實(shí)驗(yàn)需要,,實(shí)驗(yàn)檢測多次實(shí)驗(yàn),檢測環(huán)境是否進(jìn)行了充分的考慮,,實(shí)驗(yàn)確認(rèn)好實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,,認(rèn)真學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn),,理解標(biāo)準(zhǔn),并做到標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)范的步驟,,并對自己實(shí)驗(yàn)有了一定的信心后再去申請能力驗(yàn)證為宜,。

 

舉例:某實(shí)驗(yàn)室未經(jīng)過充分實(shí)驗(yàn)方法確認(rèn),實(shí)驗(yàn)平時做的也少,,直接申請了能力驗(yàn)證,。實(shí)驗(yàn)過程生疏,照方抓藥,,手忙腳亂,,造成稀釋梯度不夠,平板干燥,,菌落蔓延,,無法出具具體數(shù)值,實(shí)驗(yàn)失敗,。

 

二,、實(shí)驗(yàn)室收到盲樣菌株標(biāo)本后,首先應(yīng)做的事情,。

 

1,、檢查標(biāo)本的性狀和確認(rèn)包裝情況,然后按照要求去能力驗(yàn)證網(wǎng)站提交收到樣品情況,。

 

2,、仔細(xì)閱讀參指導(dǎo)書,包括標(biāo)本如何保存的信息,,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部工作分配,,明確工作任務(wù)和要求。

 

3,、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書的要求制訂檢驗(yàn)流程,,認(rèn)真做好準(zhǔn)備工作,包括實(shí)驗(yàn)中需要使用的器皿,,須提前做好清潔滅菌,。

 

三、能力驗(yàn)證樣品處理,。

 

1,、定量項(xiàng)目,西林瓶內(nèi)樣品不可分割,,應(yīng)全部用于檢測,。一般參考書指導(dǎo)的是加40mL稀釋液制成40mL樣品。

 

2、定量項(xiàng)目樣品稀釋,。指導(dǎo)書標(biāo)明了稀釋范圍的,,在稀釋范圍左右各加1個稀釋度進(jìn)行;書上沒有稀釋范圍的,,多做稀釋倍數(shù),,選擇合適的稀釋倍數(shù)計(jì)數(shù)(一般可稀釋至10-8)。

 

3,、定量項(xiàng)目,,除了要多做稀釋倍數(shù)外,同時同一稀釋度要多倒幾皿,,從原理上來講,,檢測過程屬于隨機(jī)抽樣檢查,平板越多,,數(shù)據(jù)越接近真值,。考慮性價比,,又不可能一直一個稀釋度很多平板,,所以能力驗(yàn)證時候多倒幾皿,求好結(jié)果,。

 

4,、定性項(xiàng)目有一些重要步驟。

 

a,、增菌及分離步驟尤其重要,。選擇合適的增菌液和分離用培養(yǎng)基對目標(biāo)菌的檢出非常關(guān)鍵,選擇兩種以上的增菌液和分離用培養(yǎng)基對菌株作直接分離和增菌后分離,。

 

b,、劃線分離十分重要,要把增菌液中的目標(biāo)菌盡量多的表達(dá)出來,,要分出單個菌落并盡可能多挑取可疑菌落,,確保分離到目標(biāo)菌,。

 

c,、生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)以營養(yǎng)瓊脂平板上的純培養(yǎng)細(xì)菌為好。

 

四,、實(shí)驗(yàn)過程一定要做陰陽對照,,全程空白對照。

 

再厲害的高手也有失手和看走眼的時候,,所以陰陽對照就是一面鏡子,。對于一些熒光染色后進(jìn)行判讀的實(shí)驗(yàn)顯得尤為重要。

 

這里掃盲一個誤區(qū),定量計(jì)數(shù)測菌數(shù)時,,我們會認(rèn)為空白就是直接取1mL無菌水然后加入到平板里,,然后混菌倒皿,這是錯誤的,。因?yàn)檫@樣做的話,,只能模擬證明稀釋后倒平板這一步有沒有污染。而無法證明從樣品稱取-樣品稀釋時候的污染質(zhì)控情況,。所以要做全程空白對照,。

 

全程空白的含義就是把無菌液當(dāng)成樣品,然后走一遍實(shí)驗(yàn)過程,。如果嚴(yán)格這么做的話,,又會走向另一個,所以全程空白只從取樣開始至稀釋10-1做了簡化,,而不做后續(xù)稀釋空白樣的混菌實(shí)驗(yàn),。

 

在有些其他實(shí)驗(yàn)時候,會有樣品空白以及稀釋液空白,,比如大氣環(huán)境NOx和SO2的檢測,,有興趣的可以去看看,對于全程空白的意義理解有更好的幫助,。

 

五,、培養(yǎng)基方面需要注意的地方。

 

1,、培養(yǎng)基配制充分混勻后再滅菌,。

 

正確做法是用一部分水?dāng)嚢杈鶆蚝螅偌尤胧S嗨?,混勻后滅菌或分裝,。

 

2、混菌法倒皿要充分混勻,。

 

培養(yǎng)基倒完要左5圈右5圈(混勻速度一定要慢,,目的是——避免培養(yǎng)基波動到二皿接觸的縫隙部分造成后續(xù)污染),找較水平位置冷卻凝固,。

 

3,、培養(yǎng)基要不要覆蓋問題。

 

覆蓋的目的是為了阻止活菌在培養(yǎng)基表層通過鞭毛移動,,造成片狀生長,,無法計(jì)數(shù)這一不利現(xiàn)象的發(fā)生。這里可以發(fā)揮主觀能動性-對于不運(yùn)動的菌,,可以不覆蓋,,對于運(yùn)動的菌覆蓋,。

 

總結(jié)一下:

 

a長期檢測同一種樣品,不覆蓋并無蔓延現(xiàn)象,,不覆蓋,;長期檢測蔓延選擇了覆蓋,一直覆蓋,。

 

b未知樣品,,進(jìn)行覆蓋和不覆蓋的比對實(shí)驗(yàn),然后決定以后同樣的樣品是否需要覆蓋,。養(yǎng)成經(jīng)驗(yàn),。

 

c能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),覆蓋和不覆蓋的都做,,不要吝惜那么一點(diǎn)點(diǎn)培養(yǎng)基或耗材,,畢竟能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)做的漂亮才是實(shí)驗(yàn)室(是室而不是人!)能力的綜合體現(xiàn),。

 

4,、培養(yǎng)過程防止平皿干燥。

 

培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基可以倒的適當(dāng)厚一些,,比如25mL,。培養(yǎng)箱底部接一個不銹鋼盆,裝上足量無菌水(沒有就去買幾瓶哇哈哈怡寶什么的水倒里面),。

 

5,、培養(yǎng)完成要保留實(shí)驗(yàn)平皿和其他相關(guān)材料。

 

作為能力驗(yàn)證,,原始記錄及實(shí)驗(yàn)報告還沒出具完成,,各種材料還是保留至數(shù)據(jù)出具后較好,便于出現(xiàn)問題現(xiàn)查原因,,馬上補(bǔ)救,。

 

題外話:很多檢測員等結(jié)果出了問題然后到網(wǎng)絡(luò)上來求救,結(jié)果一問平皿已經(jīng)洗掉了,,那就不知道是什么狀況了,。有時候你問她她還會振振有詞的講:10-1,10-2都蔓延了,,不洗掉干嘛,,10-5,10-6沒長菌,,不洗掉干嘛,?我當(dāng)時真的無語,,也不想多說話就沒繼續(xù)講了?,F(xiàn)在我回答一下這個問題:我要你一套完整梯度濃度的平皿,,可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩(wěn)定,還有蔓延是個什么狀況,,到底有多少,,是一片還是局部還是很小一部分,然后根據(jù)整體數(shù)據(jù)估算結(jié)果(當(dāng)然實(shí)驗(yàn)做成這樣也基本算失敗了,,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)沒有做到你可控的范圍),,是補(bǔ)救的一種(并不可取,屬于垂死掙扎),。定量實(shí)驗(yàn)時,,當(dāng)天做完的稀釋樣品也要放冰箱里,雖然實(shí)驗(yàn)要求不能復(fù)檢或重復(fù)檢測,,但作為微生物專業(yè)你是知道菌放在2-8℃下并不會長多少,,如果第二天一看數(shù)據(jù)有蔓延或疑問,馬上再做一次,,這樣也應(yīng)該在誤差范圍內(nèi)出數(shù),。

 

6、實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程勤觀察,。

 

微生物培養(yǎng)過程一般需要幾小時到幾十小時,,要利用這段時間觀察培養(yǎng)箱及菌生長情況,比如溫度是否穩(wěn)定,,培養(yǎng)室內(nèi)濕度如何等等,,多思多看,準(zhǔn)備預(yù)案,。方有可能得到與盲樣一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

 

原始記錄應(yīng)有條理、思路清晰,完整準(zhǔn)確地記錄菌株鑒定檢驗(yàn)的全過程,原始記錄要包含時間,、試驗(yàn)現(xiàn)象,、試驗(yàn)結(jié)果三個要素,方便試驗(yàn)出現(xiàn)問題的查找,。

 

北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng),,超低溫冰箱,生物安全柜等儀器設(shè)備可進(jìn)行對微生物分離,、鑒定等常規(guī)的分子實(shí)驗(yàn)研究,。對我國生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進(jìn)行積極的面對社會乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源,。在保證生物安全和保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的前提下,,為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康,、環(huán)境保護(hù),、科研教育提供微生物物種資源,、基因資源、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù),。

 

除此之外,,我們還擁有對菌種、細(xì)胞,、培養(yǎng)基,、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù),對購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位,,都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得優(yōu)質(zhì)服務(wù),!也正因?yàn)榇耍本┌贇W博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位,、生物制藥,、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好,、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系,!


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