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1．無菌環(huán)境

無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞系的首要條件。細胞系在活體內(nèi),，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵,，但細胞系在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力,。為保證細胞系能在體外環(huán)境中生長繁殖,，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個人衛(wèi)生,、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作,。

常見的微生物污染有支原體、細菌,、真菌,。支原體無致死毒性,，可與細胞系長期共存，對細胞系有潛在影響,，但體積小,，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進行檢測,。細菌增殖快,，在短時間內(nèi)即可大量擴增，并產(chǎn)生毒素殺死細胞系,。真菌的種類繁多,，肉眼可見，漂浮于培養(yǎng)液面上,，可呈絲狀,、管狀或樹枝狀等。

2. 合適的溫度

一般哺乳類與禽類細胞系在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃,，不適宜的環(huán)境溫度會影響細胞系的生長,。細胞系對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力，在低溫下,，細胞系的代謝活力及核分裂能力降低,。若溫度不低于0℃，雖然細胞系代謝受到影響,，但無損傷作用,；25～35℃時，細胞系以緩慢的速度生長,；但若被置于40℃數(shù)小時，則不僅不利于細胞系生存,、生長,，甚至可導(dǎo)致其死亡。

3．氣體環(huán)境與pH

細胞系的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,，氧氣,、二氧化碳是細胞系生存的必要條件。氧氣參與細胞系的三羧酸循環(huán),，為細胞系生存,、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞系的代謝產(chǎn)物,，是細胞系生長的必需成分,，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細胞系適宜的pH范圍往往是7.2～7.4,。在開放式培養(yǎng)中,，以5%的二氧化碳氣體比例為宜,。

4. 適宜的滲透壓

高滲溶液或低滲溶液會引起細胞系發(fā)生褶皺、腫脹,、破裂,。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細胞系的重要條件之一,。多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞系對滲透壓都有一定的耐受能力,，實際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細胞系,。

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