檢測范圍                                                            

0.2μmol/L-9μmol/L

使用目的

本試劑盒用于測定大鼠血清,，血漿及相關液體樣本氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)水平,。用純化的大鼠氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)，再與HRP標記的氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)濃度,。

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

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