土壤總磷/有機磷/無機磷含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用,。土壤有機磷經(jīng)過礦化分解而轉化為無機磷,。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷,，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況,。

測定原理：

利用鉬藍法定磷,。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量,；另外取一份土樣,，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機磷轉化為無機磷,，測得土壤總磷含量,；總磷含量減去無機磷含量，即可計算??有機磷含量,。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶,，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用,。

試劑三：粉劑×1 瓶,，4℃避光保存。臨用前配制,，加入 20 ml 蒸餾水,，充分溶解后加入 10 ml 試劑二，混勻,。

標準品：液體×1 支,，20 μ mol/L 無機磷標準品，4℃保存,。

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機、可調式水浴鍋,，分析天平,、可調式移液器、550℃高溫電爐,，1ml 玻璃比色皿,、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?。

土壤不同形態(tài)磷提取：

1. 無機磷：稱取通過 100 目篩子的風干土樣 0.1g,，轉移到 10 ml 離心管,，加入 10ml 試劑一，震蕩混勻,，然后置于 45℃水浴 1h,，8000g，25℃離心 10min,，取上清液一,，用于無機磷含量測定,。

2. 總磷提取：取通過 100 目篩子的風干土樣,，550℃灼燒 1h,，冷卻后稱取約 0.1g，轉移到 10 ml 離心管,，加入 10ml 試劑一,，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h,，8000g,，25℃，離心 10min,，取上清液二,，用于總磷含量測定。

測定步驟：

1. 分光光度計預熱 30 min,，調節(jié)波長到 660 nm,，蒸餾水調零。

2. 打開水浴鍋,，調節(jié)溫度到 40℃,。

3. 空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸餾水,，500μl 試劑三,，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度,，記為A 空白管。

4. 標準管：取EP 管,，依次加入 50μl 標準液,，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三,，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min,，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 標準管,。

5. 測定管：取 EP 管,，依次加入 50μl 上清液一或者上清液二，450μl 蒸餾水,，500μl 試劑三,，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度,，記為A 測定管,。

注意事項:

1,、空白管和標準管只需測定一次。

2,、試劑三配制過程中,，可能會產(chǎn)生黑色固體，其不影響結果,，注意吸取時不要將黑色固體吸入,。

土壤磷含量計算：

1. 土壤無機磷含量（μmol /g）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷W=0.2×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：20 μmol/L； W：土壤樣品質量,，g,； V 總：上清液一總體積，10 ml=0.01 L,。

2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總

÷W=0.2×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：20 μmol/L,；V 標準液：50μl=0.05 ml；W：土壤樣品質量,，g,；V 總：上清液二總體積，10 ml=0.01 L,。

3. 土壤有機磷（μmol /g）=土壤總磷-土壤無機磷