土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

土壤總磷包括有機(jī)磷和無機(jī)磷,，其中無機(jī)磷能夠直接被植物利用,。土壤有機(jī)磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷,。同時(shí)測(cè)定土壤總磷,、有機(jī)磷和無機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況,。

測(cè)定原理：

利用鉬藍(lán)法定磷,。取一份土樣，通過浸提法測(cè)定土壤無機(jī)磷含量,；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后,，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷,，測(cè)得土壤總磷含量；總磷含量減去無機(jī)磷含量,，即可計(jì)算??有機(jī)磷含量,。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存,。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用,。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存,。臨用前配制,，加入 20 ml 蒸餾水，充分溶解后加入 10 ml 試劑二，混勻,。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支,，20 μ mol/L 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存,。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋,，分析天平,、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐,，1ml 玻璃比色皿,、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?。

土壤不同形態(tài)磷提取：

1. 無機(jī)磷：稱取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣 0.1g,，轉(zhuǎn)移到 10 ml 離心管,，加入 10ml 試劑一，震蕩混勻,，然后置于 45℃水浴 1h,，8000g，25℃離心 10min,，取上清液一,，用于無機(jī)磷含量測(cè)定。

2. 總磷提?。喝⊥ㄟ^ 100 目篩子的風(fēng)干土樣,，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.1g,，轉(zhuǎn)移到 10 ml 離心管,，加入 10ml 試劑一，震蕩混勻,，然后置于 45℃水浴 1h,，8000g，25℃,，離心 10min,，取上清液二，用于總磷含量測(cè)定,。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,，調(diào)節(jié)波長到 660 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 打開水浴鍋,，調(diào)節(jié)溫度到 40℃,。

3. 空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸餾水,，500μl 試劑三,，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度,，記為A 空白管,。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP 管，依次加入 50μl 標(biāo)準(zhǔn)液,，450μl 蒸餾水,，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min,，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度,，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取 EP 管,，依次加入 50μl 上清液一或者上清液二,，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三,，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min,，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 測(cè)定管,。

注意事項(xiàng):

1,、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

2,、試劑三配制過程中,，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果,，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入,。

土壤磷含量計(jì)算：

1. 土壤無機(jī)磷含量（μmol /g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W=0.2×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量,，g； V 總：上清液一總體積,，10 ml=0.01 L,。

2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總

÷W=0.2×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；V 標(biāo)準(zhǔn)液：50μl=0.05 ml,；W：土壤樣品質(zhì)量,，g；V 總：上清液二總體積，10 ml=0.01 L,。

3. 土壤有機(jī)磷（μmol /g）=土壤總磷-土壤無機(jī)磷