犬探針?lè)晒舛縋CR試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：

1.液氮充分研磨樣品,。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,，置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL,，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min,。水浴期間顛倒樣品數(shù)次,。

5.加入350μl氯仿，充分混勻,，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中,。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移,。

7.加入4μl RNase A，渦旋混勻,。室溫放置2min,。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無(wú)水乙醇，充分混勻,。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無(wú)水乙醇,。

9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA,，棄去濾出液體,。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請(qǐng)分兩次過(guò)柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,，加入500μl緩沖液WB至柱子中,，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

11.將吸附柱重新套回收集管中,，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無(wú)水乙醇稀釋,。如果放入冰箱中,，使用前須恢復(fù)到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,，8,000×g離心1min,棄去流出液,；

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對(duì)下面的洗脫步驟至關(guān)重要,。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min,；

15. 室溫下,，離心(>13000)1min，以洗脫DNA,。保留含DNA的流出液,。將DNA儲(chǔ)于-20℃。