分析型流式細胞儀檢測原理

將待測樣品制成單細胞懸液，在鞘液的包裹下進入流式細胞儀內的檢測區(qū)域,，細胞在激光的照射下會發(fā)生散射和折射，產生的散射光信號和熒光信號由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的強度與細胞直徑成正相關,，可以理解為細胞直徑越大，F(xiàn)SC越強,，細胞直徑越小,，F(xiàn)SC越弱。所以可以利用細胞的FSC值初步比較細胞的大小,，利用FSC值對細胞進行分群和分類,。  

側向角散射光（SSC）的強度與細胞內顆粒結構復雜程度成正相關（與細胞中所含的細胞器、細胞核等的數(shù)量成正比）,，可以理解為細胞內顆粒結構越復雜,，SSC越強；細胞內顆粒結構越簡單,，SSC越弱,。所以可以利用細胞的SSC值初步比較細胞的顆粒度，利用SSC值對細胞進行分群和分類,。

當細胞通過激光束時,，檢測器會檢測到細胞或顆粒的散射光，放置在前面的檢測器檢測FSC值,，而放置在側面的多個檢測器檢測SSC值,。通過綜合分析前向散射FSC和側向散射SSC的數(shù)據，便能根據細胞大小,、形狀和復雜度將其進行分群分類,。由于樣品細胞不需要標記任何熒光化合物偶聯(lián)抗體，直接上樣分析得到FSC值和SSC值,，其值代表細胞的大小和顆粒度兩個物理特征,，所以FSC-SSC散點圖又稱為 “物理圖”。

分選型流式細胞儀檢測原理

當細胞懸液放入樣品管中,，被高壓壓入流動室內,。流動室內充滿鞘液,，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列,，以一定速度從流動室噴口噴出,。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動,，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正,、負不同的電荷,，當液滴流經過帶有幾千伏的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉落入各自的收集容器中,，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器,，從而實現(xiàn)細胞的分離。流式細胞儀除了根據FSC和SCC散射度或熒光(如DNA,、RNA或蛋白含量,，酶活性，特異抗原) 散射度差異來分離細胞外,，更多的采用細胞表面抗原標記的熒光強度差異來分離細胞,。每種細胞表面具有du te的抗原，當形態(tài)學檢測難以區(qū)別時,，免疫表型參數(shù)對細胞分選有決定性作用,。

流式細胞術結果

熒光信號和散射光信號通過波長選擇的濾光片，由相應的光電管和電子檢測器接收并轉換成電信號,，經放大器放大后送入計算機并進行分析顯示和結果輸出,，測定的結果常用流式直方圖、流式散點圖,、流式密度圖和流式等高線圖來表示,。

流式細胞術樣本類型

流式細胞儀可檢測多種樣本：外周血、骨髓,、細胞穿刺液、洗脫液,、實體組織,、培養(yǎng)細胞、微生物,。

流式細胞術應用

1.流式細胞術可以用來檢測細胞表面以及胞內的各種標志,，對細胞進行分群鑒定以及各種蛋白表達量高低的比較。

2.通過標記Ki67,、BCL-2,、caspases等增殖及凋亡相關基因,，流式細胞術可用來檢測細胞的增殖以及凋亡。

3.流式細胞術可用來分析細胞周期,。細胞核DNA含量隨著細胞增殖周期時相的不同而發(fā)生變化,，用DNA染料進行染色，DNA含量多,，熒光信號強,，DNA含量少，熒光強度低,。

4.在腫瘤學研究中尤其常用,，流式細胞術可以用于判斷藥物對腫瘤細胞影響、腫瘤的生長速度等,。