細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是生物醫(yī)學(xué)研究中的重要工具，而超凈工作臺(tái)作為細(xì)胞培養(yǎng)的主要操作平臺(tái),，其無菌狀態(tài)直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,。微生物污染不僅可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,，還可能對(duì)研究人員的健康構(gòu)成威脅,。因此,，如何盡可能降低超凈工作臺(tái)的微生物污染是每位細(xì)胞實(shí)驗(yàn)人員必須重視的問題,。以下將從多個(gè)方面探討降低污染的措施,。

一,、超凈工作臺(tái)的日常維護(hù)與清潔

1. 定期清潔：超凈工作臺(tái)應(yīng)至少每周進(jìn)行一次內(nèi)部清潔。清潔時(shí),，先關(guān)閉電源,，用75%酒精仔細(xì)擦拭工作臺(tái)面、側(cè)壁,、后壁以及通風(fēng)口等各個(gè)部位,，去除灰塵和可能殘留的微生物。同時(shí),，定期清潔或更換預(yù)過濾器,，確保其過濾效率。

2. 正確使用紫外燈：在使用超凈工作臺(tái)前,，應(yīng)開啟紫外燈照射30分鐘以上進(jìn)行消毒,。照射完畢后，讓風(fēng)機(jī)運(yùn)行10-15分鐘,，以排除臭氧并使工作臺(tái)內(nèi)的空氣達(dá)到潔凈狀態(tài),。

3. 操作注意事項(xiàng)：在操作過程中，避免頻繁進(jìn)出超凈工作臺(tái),，防止外界未經(jīng)過濾的空氣進(jìn)入,。盡量減少在工作臺(tái)上放置不必要的物品，只擺放即將使用的試劑,、耗材和儀器,，保持操作臺(tái)面的整潔。

二,、實(shí)驗(yàn)室的整體環(huán)境控制

1. 定期打掃實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期進(jìn)行全面清掃，包括地面,、墻壁,、實(shí)驗(yàn)臺(tái)和儀器設(shè)備等。使用合適的消毒劑對(duì)地面和實(shí)驗(yàn)臺(tái)進(jìn)行消毒處理,，如用含氯消毒劑擦拭地面,，用75%酒精擦拭實(shí)驗(yàn)臺(tái)。

2. 清潔通風(fēng)系統(tǒng)和空調(diào)設(shè)備：定期清潔通風(fēng)系統(tǒng)和空調(diào)設(shè)備,，防止灰塵和微生物在室內(nèi)循環(huán),。

3. 控制人員流動(dòng)和物品進(jìn)出：限制實(shí)驗(yàn)室的人員進(jìn)入,，只有經(jīng)過培訓(xùn)且穿戴好無菌服、口罩和手套的人員才能進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域,。對(duì)于進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的物品,，如細(xì)胞培養(yǎng)試劑、耗材和儀器等,，必須經(jīng)過嚴(yán)格的消毒或滅菌處理,。

三、實(shí)驗(yàn)器材和試劑的無菌處理

1. 高溫高壓滅菌：對(duì)于可以耐受高溫高壓的實(shí)驗(yàn)器材,，如玻璃培養(yǎng)瓶,、離心管、移液管等,，采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌,。將器材清洗干凈后，用牛皮紙或?qū)Ｓ脺缇b材料包裝好,，放入高壓滅菌鍋中,，在121℃、1.05kg/cm2壓力下滅菌15-20分鐘,。

2. 干熱滅菌：一些不能耐受濕熱的器材,，如金屬鑷子、剪刀等,，可以采用干熱滅菌法,。將器材放入干熱滅菌箱中，在160-180℃下滅菌2-4小時(shí),。

3. 過濾滅菌：對(duì)于一些不能高溫滅菌的試劑,，如含有蛋白質(zhì)或生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基、抗生素溶液等,，采用0.22μm或0.45μm的濾膜進(jìn)行過濾滅菌,。在過濾過程中，要確保濾膜的完整性和無菌操作,。

四,、實(shí)驗(yàn)操作的規(guī)范性

1. 手部消毒和穿戴無菌裝備：操作人員在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作前，必須用肥皂和流動(dòng)水洗手,，然后用75%酒精擦拭雙手,。同時(shí)，要穿戴好無菌的實(shí)驗(yàn)服,、口罩,、帽子和手套，手套要經(jīng)常更換，尤其是在接觸不同的試劑或細(xì)胞培養(yǎng)容器后,。

2. 規(guī)范的操作動(dòng)作：在操作過程中,，要保持動(dòng)作的輕柔和規(guī)范。例如,，使用移液器吸取液體時(shí),，要避免液體濺出；打開培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿時(shí),，要盡量減少開口的大小和時(shí)間,，防止外界空氣進(jìn)入；在細(xì)胞傳代或接種時(shí),，要確保細(xì)胞懸液均勻分布,，避免細(xì)胞聚集或局部濃度過高。

五,、細(xì)胞培養(yǎng)過程中的注意事項(xiàng)

1. 檢查試劑狀態(tài)：在使用試劑前,，要仔細(xì)檢查其外觀和狀態(tài)，如培養(yǎng)基是否有沉淀或變色,、血清是否有絮狀物等,。如果發(fā)現(xiàn)試劑有異常，應(yīng)停止使用,，重新檢查其質(zhì)量或更換新的試劑,。

2. 避免交叉污染：在使用試劑時(shí)，要使用無菌的移液器和槍頭,，并且每次使用后要及時(shí)更換槍頭,，防止試劑之間的交叉污染。

3. 培養(yǎng)箱內(nèi)的環(huán)境控制：培養(yǎng)箱內(nèi)的風(fēng)速和風(fēng)向?qū)Ρ３譁囟染鶆蚝捅苊馕廴臼种匾?。適當(dāng)?shù)娘L(fēng)速有助于維持溫度穩(wěn)定,，但風(fēng)速過大可能導(dǎo)致培養(yǎng)基干裂。同時(shí),，保持適宜濕度,，有利于微生物生長(zhǎng)。

六,、驗(yàn)證與監(jiān)測(cè)

1. 驗(yàn)證滅菌效果：對(duì)于一些關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)器材,，可以采用生物指示劑（如嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢）來驗(yàn)證滅菌效果。將生物指示劑與器材一起滅菌后,，按照規(guī)定的方法進(jìn)行培養(yǎng)和檢測(cè),，如果生物指示劑沒有生長(zhǎng)，說明滅菌效果良好,。

2. 定期檢測(cè)：使用支原體檢測(cè)試劑盒等工具定期檢測(cè)細(xì)胞是否受污染，一旦發(fā)現(xiàn)污染，立即丟棄被污染的培養(yǎng)瓶,，并清潔培養(yǎng)環(huán)境,，消毒所有相關(guān)設(shè)備。