諾博萊德 JM110 感受態(tài)細胞

JM110 感受態(tài)細胞   載體構建

產(chǎn)品貨號：C9248

產(chǎn)品名稱：JM110 感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderC9248 JM110 感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 JM110 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,，可用于 DNA 的化學轉化,。屬于dam-，dcm- 的菌株,，排除dam,，dcm甲基化的影響。使用 pUC19質(zhì)粒檢測,，轉化效率可達 106cfu/µg,。pEGFP-N1轉化JM110后XbaⅠ位點去甲基化，提取的質(zhì)?？杀籜baⅠ酶切開,，線性化質(zhì)粒大小為4733bp。

基因型:

rpsL(Strr)thrleuthi-1lacYgalKgalTaratonAtsxdamdcmsupE44Δ(lac-proAB)/F′[traD36proABlacIqZΔM15]

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中,，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,，置于冰浴中。

2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA,，輕輕旋轉離心管以混勻內(nèi)容物,，在冰浴中靜置30分鐘,。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60秒鐘,，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2分鐘,，該過程不要搖動離心管,。

4. 向每個離心管中加入500μL無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃150rpm,，

搖床振蕩培養(yǎng)60分鐘,，目的是使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇,。

5. 無菌條件下,，取適量菌液加到含相應抗生素的LB固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將細胞均勻涂開,。等平板中的液體wan全吸收后,，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時,。

6. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中,，視平板上菌落生長情況決定去留。

注意事項：

1．感受態(tài)細胞應保存在-70℃,，不可反復凍融,，否則其轉化效率將會降低,。

2．實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染,，避免為以后的篩選,、鑒定帶來影響。

3．轉化時,，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一,。

4．轉化率的計算：轉化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量,。

5．為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物,，以重新轉化,，將損失降到*低。

JM110 感受態(tài)細胞   載體構建

產(chǎn)品訂購信息

C9248 JM110 感受態(tài)細胞  20*100ul