微生物平板菌落計(jì)數(shù)法之標(biāo)準(zhǔn)步驟與具體操作方法有哪些,？快來看一看吧,！

操作方法一：

1,、以無菌操作取檢樣25g（或25ml),，放于225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),，經(jīng)充分振搖或研磨制成1：10的均勻稀釋液,。固體檢樣在加入稀釋液后,，置滅菌均質(zhì)器中以8000~10000r/min的速度處理1min，制成1：10的均勻稀釋液,。用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml,，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混合均勻,，制成1：100的稀釋液,。另取1ml滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序，制10倍遞增稀釋液,，如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管,。

2、無菌操作：操作中必須有“無菌操作”的概念,，所用玻璃器皿必須是滅菌的,，不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀,、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理,。樣品如果有包裝，應(yīng)用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣,。操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進(jìn)行,。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘，每個(gè)平板不得超過15個(gè)菌落,。

3,、采樣的代表性：如系固體樣品，取樣時(shí)不應(yīng)集中一點(diǎn),，宜多采幾個(gè)部位,。固體樣品必須經(jīng)過均質(zhì)或研磨，液體樣品須經(jīng)過振搖,，以獲得均勻稀釋液,。

4、樣品稀釋誤差：為減少樣品稀釋誤差,，在連續(xù)遞次稀釋時(shí),，每一稀釋液應(yīng)充分振搖，使其均勻,，同時(shí)每一稀釋度應(yīng)更換一支吸管,。在進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí)，應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿管壁流入,，勿使吸管伸入稀釋液內(nèi),，以免吸管外部粘附的檢液溶于其內(nèi)。為減少稀釋誤差,，SN標(biāo)準(zhǔn)采用取10mL稀釋液,，注入90mL緩沖液中。

5,、稀釋液：樣品稀釋液主要是滅菌生理鹽水,，有的采用磷酸鹽緩沖液（或0.1%蛋白胨水），后者對食品中已受損傷的細(xì)菌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用,。如對含鹽量較高的食品（如醬油）進(jìn)行稀釋,，可以采用滅菌蒸餾水,。

操作方法二：

1、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì),，選擇2~3個(gè)適宜稀釋度,，分別在制10倍遞增稀釋的同時(shí)，以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中,，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml,，并轉(zhuǎn)動平皿,，混合均勻。同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對照,。待瓊脂凝固后,，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h,，取出計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目,，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數(shù),。

2,、傾注用培養(yǎng)基應(yīng)在46℃水浴內(nèi)保溫，溫度過高會影響細(xì)菌生長,，過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻,。如無水浴，應(yīng)以皮膚感受較熱而不燙為宜,。傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一,，從12~20ml不等，一般以15ml較為適宜,，平板過厚可影響觀察,，太薄又易于干裂。傾注時(shí),，培基底部如有沉淀物,，應(yīng)將底部棄去，以免與菌落混淆而影響計(jì)數(shù)觀察,。

3,、為使菌落能在平板上均勻分布，檢液加入平皿后,，應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,，可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，檢樣從開始稀釋到傾注個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過20min,，以防止細(xì)菌有所死亡或繁殖,。

4,、培養(yǎng)溫度一般為37℃（水產(chǎn)品的培養(yǎng)溫度，由于其生活環(huán)境水溫較低,，故多采用30℃）,。培養(yǎng)時(shí)間一般為48h，有些方法只要求24h的培養(yǎng)即可計(jì)數(shù),。培養(yǎng)箱應(yīng)保持一定的濕度,，瓊脂平板培養(yǎng)48h后，培養(yǎng)基失重不應(yīng)超過15%,。

5,、為了避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質(zhì)與細(xì)菌菌落發(fā)生混淆,，不易分辨,，可同時(shí)作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板，不經(jīng)培養(yǎng),，而于4℃環(huán)境中放置,，以便計(jì)數(shù)時(shí)作對照觀察。在某些場合,，為了防止食品顆粒與菌落混淆不清,，可在營養(yǎng)瓊脂中加入氯化三苯四氮唑（TTC），培養(yǎng)后菌落呈紅色,，易于分別,。

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