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微生物平板菌落計(jì)數(shù)法之標(biāo)準(zhǔn)步驟與具體操作方法,!

來源:北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司   2025年01月15日 14:52  

微生物平板菌落計(jì)數(shù)法之標(biāo)準(zhǔn)步驟與具體操作方法有哪些,?快來看一看吧,!

 

操作方法一:

 

1,、以無菌操作取檢樣25g(或25ml),,放于225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),,經(jīng)充分振搖或研磨制成1:10的均勻稀釋液,。固體檢樣在加入稀釋液后,,置滅菌均質(zhì)器中以8000~10000r/min的速度處理1min,制成1:10的均勻稀釋液,。用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,,沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混合均勻,,制成1:100的稀釋液,。另取1ml滅菌吸管,按上項(xiàng)操作順序,制10倍遞增稀釋液,,如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管,。

 

2、無菌操作:操作中必須有“無菌操作”的概念,,所用玻璃器皿必須是滅菌的,,不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀,、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理,。樣品如果有包裝,應(yīng)用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣,。操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進(jìn)行,。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘,每個(gè)平板不得超過15個(gè)菌落,。

 

3,、采樣的代表性:如系固體樣品,取樣時(shí)不應(yīng)集中一點(diǎn),,宜多采幾個(gè)部位,。固體樣品必須經(jīng)過均質(zhì)或研磨,液體樣品須經(jīng)過振搖,,以獲得均勻稀釋液,。

 

4、樣品稀釋誤差:為減少樣品稀釋誤差,,在連續(xù)遞次稀釋時(shí),,每一稀釋液應(yīng)充分振搖,使其均勻,,同時(shí)每一稀釋度應(yīng)更換一支吸管,。在進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí),應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿管壁流入,,勿使吸管伸入稀釋液內(nèi),,以免吸管外部粘附的檢液溶于其內(nèi)。為減少稀釋誤差,,SN標(biāo)準(zhǔn)采用取10mL稀釋液,,注入90mL緩沖液中。

 

5,、稀釋液:樣品稀釋液主要是滅菌生理鹽水,,有的采用磷酸鹽緩沖液(或0.1%蛋白胨水),后者對食品中已受損傷的細(xì)菌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用,。如對含鹽量較高的食品(如醬油)進(jìn)行稀釋,,可以采用滅菌蒸餾水,。

 

操作方法二:

 

1、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì),,選擇2~3個(gè)適宜稀釋度,,分別在制10倍遞增稀釋的同時(shí),以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中,,每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml,,并轉(zhuǎn)動平皿,,混合均勻。同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內(nèi)作空白對照,。待瓊脂凝固后,,翻轉(zhuǎn)平板,置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h,,取出計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目,,乘以稀釋倍數(shù),即得每克(每毫升)樣品所含菌落總數(shù),。

 

2,、傾注用培養(yǎng)基應(yīng)在46℃水浴內(nèi)保溫,溫度過高會影響細(xì)菌生長,,過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻,。如無水浴,應(yīng)以皮膚感受較熱而不燙為宜,。傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一,,從12~20ml不等,一般以15ml較為適宜,,平板過厚可影響觀察,,太薄又易于干裂。傾注時(shí),,培基底部如有沉淀物,,應(yīng)將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計(jì)數(shù)觀察,。

 

3,、為使菌落能在平板上均勻分布,檢液加入平皿后,,應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,,可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn),檢樣從開始稀釋到傾注個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過20min,,以防止細(xì)菌有所死亡或繁殖,。

 

4,、培養(yǎng)溫度一般為37℃(水產(chǎn)品的培養(yǎng)溫度,由于其生活環(huán)境水溫較低,,故多采用30℃),。培養(yǎng)時(shí)間一般為48h,有些方法只要求24h的培養(yǎng)即可計(jì)數(shù),。培養(yǎng)箱應(yīng)保持一定的濕度,,瓊脂平板培養(yǎng)48h后,培養(yǎng)基失重不應(yīng)超過15%,。

 

5,、為了避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質(zhì)與細(xì)菌菌落發(fā)生混淆,,不易分辨,,可同時(shí)作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板,不經(jīng)培養(yǎng),,而于4℃環(huán)境中放置,,以便計(jì)數(shù)時(shí)作對照觀察。在某些場合,,為了防止食品顆粒與菌落混淆不清,,可在營養(yǎng)瓊脂中加入氯化三苯四氮唑(TTC),培養(yǎng)后菌落呈紅色,,易于分別,。

 

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