一文教你如何使用基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑-聚凝胺(Polybrene)來提高轉(zhuǎn)染效率

來源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司 2024年12月24日 09:10

Polybrene,，也稱為Hexadimethrine Bromide，是一種多聚陽(yáng)離子聚合物,，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,。它主要用作基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑,，尤其是在逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染中。Polybrene的作用機(jī)理可能是通過中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥,，從而促進(jìn)病毒顆粒與細(xì)胞的吸附作用。

圖1.聚凝胺(Polybrene)結(jié)構(gòu)式

在病毒介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染中,，它能顯著提高慢病毒和腺病毒等對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的感染效率,。此外，Polybrene在DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中也能增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率,，為基因功能研究和基因治療提供支持,。它還作為一種抗肝素劑，用于中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷,，制備非特異性凝集的紅細(xì)胞,。在蛋白測(cè)序領(lǐng)域，Polybrene通過增加多肽的降解和提高PVDF膜的親水性,，有助于降低測(cè)序過程中多肽的機(jī)械損傷,，從而改善測(cè)序結(jié)果。這些多樣化的應(yīng)用使Polybrene成為實(shí)驗(yàn)室中的工具,。

Polybrene的使用濃度需根據(jù)細(xì)胞類型優(yōu)化,，一般建議在2至10μg/mL，常用濃度為5至8μg/mL,。使用前,，應(yīng)查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定濃度。鑒于Polybrene對(duì)某些細(xì)胞株可能有毒，尤其是分化的神經(jīng)元和樹突狀細(xì)胞,，使用前應(yīng)進(jìn)行毒性測(cè)試,。此外，由于Polybrene可能對(duì)人體有害,，操作時(shí)須穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服和手套,，避免直接接觸和吸入。關(guān)于儲(chǔ)存,，Polybrene在-20℃下建議分裝保存,，以保持活性長(zhǎng)達(dá)兩年以上，避免多次凍融,。

產(chǎn)品應(yīng)用介紹

Polybrene在慢病毒感染中的應(yīng)用

細(xì)胞接種

首先,，在24孔板（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適大小的培養(yǎng)容器）中按照實(shí)驗(yàn)需求鋪板細(xì)胞，確保第二天細(xì)胞密度約為50-70%,，并在37℃條件下培養(yǎng)過夜,。

病毒準(zhǔn)備

第二天，從-80℃冰箱取出慢病毒,，置于冰浴中融化,。根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用新鮮培養(yǎng)基將病毒稀釋至適當(dāng)?shù)腗OI濃度,。切記輕柔混勻,，避免使用振蕩器以免破壞病毒粒子。

注：MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒體積（mL）/細(xì)胞個(gè)數(shù)

感染過程

將細(xì)胞原有的培養(yǎng)基吸去,，加入預(yù)先稀釋好的病毒液,、培養(yǎng)基和Polybrene輕輕搖勻，并在37℃下培養(yǎng)過夜,。制備混合液時(shí),，請(qǐng)按以下順序：首先加入預(yù)熱至37°C的培養(yǎng)基，接著加入病毒液混勻,，最后加入Polybrene至所需終濃度（通常為2-10μg/ml,，具體濃度可能因細(xì)胞類型而異，請(qǐng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)）,。

注：對(duì)于某些細(xì)胞如Jurkat,、kasumi、NB4,、H929,、GBC-SD、MCF-7等,，以及大部分原代細(xì)胞,，通常不建議添加Polybrene,。

換液培養(yǎng)

感染48小時(shí)后,，將含病毒的培養(yǎng)基吸除,，并替換為新鮮培養(yǎng)基,。若感染后24h觀察細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，也可在24h更換新的培養(yǎng)基,。

檢測(cè)分析

繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24至48小時(shí)，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求收集細(xì)胞,，以檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況。

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選（可選）

確定目的蛋白成功表達(dá)后,，可根據(jù)載體抗性（puro,、neo,、Hygromycin B）,，加入對(duì)應(yīng)的篩選藥物；初次構(gòu)建,，需要先對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行最佳篩選藥物濃度測(cè)試,，確定篩選藥物添加量；可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,，進(jìn)行pool或minipool篩選,。

翌圣生物的聚凝胺（Polybrene）以其品質(zhì)，已經(jīng)成為科研領(lǐng)域中的工具,。自推出以來,，它已經(jīng)助力科研人員發(fā)表了68篇科研論文，這些論文的總影響因子累計(jì)達(dá)到545.607,。這些成果發(fā)表在包括《Cell Discovery》,、《Cell Metabolism》和《Journal of Extracellular Vesicles》等期刊上。這一數(shù)據(jù)不僅證明了聚凝胺在科研中的重要地位,，也反映了其在提升實(shí)驗(yàn)效率和成功率方面的顯著作用,。

部分參考文獻(xiàn)（使用翌圣Polybrene發(fā)表）

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1、Niu B, Tian T, Wang L, et al. CCL9/CCR1 axis-driven chemotactic nanovesicles for attenuating metastasis of SMAD4-deficient colorectal cancer by trapping TGF-β. Acta Pharm Sin B. 2024;14(8):3711-3729. doi:10.1016/j.apsb.2024.05.009（IF=14.5）

2,、Wu S, Wang S, Lin X, et al. Lanatoside C inhibits herpes simplex virus 1 replication by regulating NRF2 distribution within cells. Phytomedicine. 2024;124:155308. doi:10.1016/j.phymed.2023.155308（IF=7.9）

3,、Chen S, Chen G, Xu F, et al. Treatment of allergic eosinophilic asthma through engineered IL-5-anchored chimeric antigen receptor T cells. Cell Discovery. 2022;8:80. doi.org/10.1038/s41421-022-00433-y（IF=38.079）

4,、Li X, Zhang Y, Xu L, et al. Ultrasensitive sensors reveal the spatiotemporal landscape of lactate metabolism in physiology and disease. Cell Metab. 2023;35(1):200-211.e9. doi:10.1016/j.cmet.2022.10.002（IF=31.373）

5,、Lu T, Zhang Z, Zhang J, et al. CD73 in small extracellular vesicles derived from HNSCC defines tumour-associated immunosuppression mediated by macrophages in the microenvironment. J Extracell Vesicles. 2022;11(5):e12218. doi:10.1002/jev2.12218（IF=25.841）

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
Hieff Trans®Polybrene(hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/mL)	500 μL/5×500 μL	40804ES76/40804ES86

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