高效液相色譜儀操作步驟：　

1)過濾流動相,，根據(jù)需要選擇不同的濾膜,。

2)對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3)打開HPLC工作站（包括計算機(jī)軟件和色譜儀）,，連接好流動相管道,，連接檢測系統(tǒng),。

4)進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual,，進(jìn)入手動菜單,。

5)有一段時間沒用，或者換了新的流動相,，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥,。沖洗泵，直接在泵的出水口,，用針頭抽取,。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下,，先點(diǎn)擊purge,，再點(diǎn)擊start，沖洗時速度不要超過10 ml/min,。

6)調(diào)節(jié)流量,，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力,，流速越大,，壓力越大，一般不要超過2000,。點(diǎn)擊injure,，選用合適的流速，點(diǎn)擊on,，走基線,，觀察基線的情況。

7)設(shè)計走樣方法,。點(diǎn)擊file,，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法,。若需建立一個新的方法,，點(diǎn)擊new method。選取需要的配件,，包括進(jìn)樣閥,，泵，檢測器等,，根據(jù)需要而不同,。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流,，一般2-5分鐘,；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換,；d.走樣時間,，隨不同的樣品而不同。

8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作,。選定走樣方法,，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣,，所有的樣品均需過濾,。方法走完后，點(diǎn)擊postrun,，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等,。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線,，洗掉剩余物,。

9)關(guān)機(jī)時，先關(guān)計算機(jī),，再關(guān)液相色譜,。

10)填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字,。

注意事項

1)流動相均需色譜純度,，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡,。

2)柱子是非常脆弱的,，次做的方法，先不要讓液體過柱子,。

3)所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾,。

4)壓力不能太大，不要超過2000 psi

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