人酸性神經(jīng)鞘磷脂酶（ASM）ELISA檢測(cè)試劑盒洗滌方法：

1. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl,，注入與吸出間隔60秒,。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，在潔凈的吸水紙上拍干,，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘,，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次,。

實(shí)驗(yàn)開始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí),，均需充分混勻,，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,，37℃孵育2小時(shí),。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

2.棄去液體,，甩干，每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),，酶標(biāo)板加上覆膜,，37℃溫育1小時(shí)。

3.棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘,，大約350μl /每孔,，甩并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

干4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,，加上覆膜,，37℃溫育1小時(shí)。

5.棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次，方法同步驟3,。

6.每孔加底物溶液100μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過30分鐘,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng),，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值),。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,，預(yù)熱儀器,，設(shè)置好檢測(cè)程序,。

9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。