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超高通量生物透射電鏡的樣品制備與操作

來源：奧達(dá)科學(xué)有限公司 2024年12月03日 17:02

　　超高通量生物透射電鏡的樣品制備與操作要求非常嚴(yán)格,，以下是詳細(xì)的步驟和注意事項：

　　一、樣品制備

　　取材

　　新鮮取材是關(guān)鍵,，組織或細(xì)胞必須保持新鮮,，避免固定前的任何結(jié)構(gòu)變化,。

　　取材體積要小，一般控制在1~2mm³,，以確保固定液能夠充分滲透,。

　　取材位置要準(zhǔn)確，直接針對需要觀察的目的部位,，避免不必要的損傷,。

　　操作過程中要保持低溫，所有物品都要預(yù)冷,，以防止樣品結(jié)構(gòu)變化。

　　固定

　　固定是為了保護(hù)樣品結(jié)構(gòu),，使其在后續(xù)操作中不受破壞,。固定液由固定劑和緩沖液組成，緩沖液模仿細(xì)胞外液成分,，維持穩(wěn)定的pH值和滲透壓,。

　　新鮮取材后立即投入4℃預(yù)冷的固定液中，然后放入4℃冰箱固定保存,。

　　對于無法下沉的樣品,，可以通過抽真空使其沉下去。

　　脫水

　　脫水是為了讓包埋劑能夠滲入組織內(nèi)部,。常用的脫水劑有酒精,、丙酮等。

　　脫水時間不宜過長,，常用逐級梯度脫水，如依次浸泡酒精濃度為30%,、50%,、70%、80%,、90%,、100%的溶液，一般浸泡時間為10~20分鐘,，最后可以用100%丙酮浸泡,。

　　包埋

　　包埋包括滲透,、包埋和聚合三個步驟,。

　　配制包埋劑時，軟硬度要易于調(diào)節(jié),，易于滲透,。

　　包埋時要防止產(chǎn)生氣泡,，聚合時的溫度要盡可能低。

　　切片

　　將經(jīng)過滲透處理的樣品包埋起來后,，進(jìn)行切片處理,，獲得70~90nm的切片。

　　染色

　　切片經(jīng)檸檬酸鉛溶液和醋酸雙氧鈾50%乙醇飽和溶液各染色5~10分鐘,，晾干后即可在透射電鏡中觀察,。

　　二、操作要求

　　操作環(huán)境

　　透射電子顯微鏡需要在高真空環(huán)境下工作,，因此樣品必須保持干燥和清潔,。

　　操作室內(nèi)應(yīng)保持恒定的溫度和濕度，以防止樣品在觀察過程中發(fā)生變化,。

　　操作技能

　　操作人員需要具備專業(yè)的知識和技能,，熟悉透射電子顯微鏡的工作原理和操作流程。

　　在進(jìn)行樣品觀察和拍攝時,，需要掌握合適的放大倍數(shù),、焦距和曝光時間等參數(shù)。

　　安全防護(hù)

　　透射電子顯微鏡操作過程中需要接觸高電壓和高真空環(huán)境,，因此必須采取嚴(yán)格的安全防護(hù)措施,。

　　操作人員需要穿戴合適的防護(hù)服和手套，避免直接接觸高壓部件和真空系統(tǒng),。

　　維護(hù)與保養(yǎng)

　　定期對透射電子顯微鏡進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng),，包括清潔鏡頭、檢查真空系統(tǒng),、調(diào)整電子束等,。

　　保持設(shè)備的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，確保實驗結(jié)果的可靠性,。

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