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上海研域生物操作常見細胞培養(yǎng)實驗

來源:研域(上海)化學試劑有限公司   2024年11月08日 09:16  


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細胞系(cell line)指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體,。 也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。(由此便引申出了后來的有限細胞系(FiniteCellLine),、無限細胞系(InfiniteCellLine)),因此,,細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞(特定環(huán)境下口語和書面語都使用),,廣義是指可傳代的細胞。

細胞傳代:

a,、棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

b,、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min(視細胞情況而定),,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,,1000rpm離心5min,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

c,、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例;a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,,裝入無菌離心管中,1000rpm條件下離心4min,,棄去上清液,,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,,進行細胞計數(shù),。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,,使細胞密度5×106~1×107/mL,,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,,注意凍存管做好標識,。將凍存管放入-80℃冰箱,24h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

復蘇細胞:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000rpm條件下離心3min,,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,,加入約8mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度,。


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