在繼續(xù)探討HGC-27細(xì)胞,，即人未分化胃癌細(xì)胞的操作步驟時,，我們需細(xì)致入微地確保每一步的精確性和無菌操作的重要性,。

    首先，進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇時,，需快速將凍存的HGC-27細(xì)胞從液氮中取出,，并迅速置于37℃水浴中輕輕搖晃，確保細(xì)胞在1分鐘內(nèi)融化,。隨后,，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至預(yù)裝有培養(yǎng)基的離心管中，輕柔混勻后離心,，去除上清液,，再加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至培養(yǎng)瓶中,，置于37℃,、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

   細(xì)胞傳代時,，待細(xì)胞長至80%-90%融合度,，棄去舊培養(yǎng)基，用PBS清洗兩次后,，加入適量胰酶消化細(xì)胞,，待細(xì)胞變圓、間隙增大時,，加入培養(yǎng)基終止消化,，吹打制成細(xì)胞懸液，按一定比例分至新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),。

    此外,，細(xì)胞凍存也至關(guān)重要。選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞,，按上述方法消化,、離心后，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,，調(diào)整細(xì)胞密度至適宜范圍,，分裝至凍存管中，標(biāo)記好細(xì)胞名稱,、凍存日期等信息后,，按梯度降溫法逐步冷凍,，最終置于液氮中長期保存。

    在整個操作過程中,，嚴(yán)格的無菌操作,、精準(zhǔn)的細(xì)胞計數(shù)以及適時的培養(yǎng)基更換，都是確保HGC-27細(xì)胞健康生長和實(shí)驗成功的關(guān)鍵,。