納米顆粒跟蹤分析 (NTA, Nanoparticle Tracking Analysis) 是一種通過跟蹤并分析單個(gè)納米顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)來測(cè)量粒徑和濃度的技術(shù),。盡管NTA能夠提供納米顆粒的粒徑分布和濃度信息,，但由于以下原因，它無法提供傳統(tǒng)意義上的LOD：

NTA依賴于光散射來檢測(cè)顆粒,，而不同顆粒的散射強(qiáng)度差異較大，尤其是在樣品中存在多分散性時(shí),，大顆粒散射光強(qiáng)往往將小顆粒信號(hào)遮擋，導(dǎo)致粒徑偏大,，濃度偏低,。因此，不同粒徑的顆?？赡軙?huì)產(chǎn)生不同的信號(hào)強(qiáng)度,，使得定義一個(gè)統(tǒng)一的LOD變得困難。

2,、顆粒濃度影響：

NTA的檢測(cè)范圍受到顆粒濃度的限制,。濃度過高時(shí)，大小顆粒之間的相互干擾會(huì)導(dǎo)致分析不準(zhǔn)確,；濃度過低時(shí),，無法檢測(cè)到足夠數(shù)量的顆粒亦會(huì)造成取樣誤差和隨機(jī)誤差（。因此,，很難確定一個(gè)適用于所有樣品的低濃度檢測(cè)限（不同的樣本的LOD會(huì)有所不同）,。同時(shí)，即便是純化后的細(xì)胞外囊泡這類明確的樣本其線性濃度區(qū)間也通常只能集中于一個(gè)數(shù)量級(jí)^[1][2],。

3,、光學(xué)系統(tǒng)的限制：

NTA的檢測(cè)靈敏度還取決于光學(xué)系統(tǒng)的分辨能力以及參數(shù)設(shè)定，特別是在檢測(cè)小尺寸的納米顆粒時(shí),。光學(xué)分辨能力的局限使得難以為NTA技術(shù)定義一個(gè)統(tǒng)一的LOD,。

由于這些因素，NTA在粒徑和濃度表征種提供的是一種相對(duì)定量的結(jié)果,，而非絕對(duì)的低檢測(cè)限,。

動(dòng)態(tài)光散射 (DLS，Dynamic Light Scattering) 本質(zhì)上是一種用于測(cè)量懸浮液中納米顆粒或大分子的擬合粒徑的方法,。由于DLS依賴于顆粒散射光的強(qiáng)度,，同樣的，在確定檢測(cè)限LOD上通常具有一定的局限性：

1,、散射強(qiáng)度的依賴性：

DLS測(cè)量的是樣品中所有顆粒的平均布朗運(yùn)動(dòng),，因此，較小的顆?；蛘叩蜐舛鹊念w粒產(chǎn)生的散射信號(hào)可能被背景噪聲淹沒,，難以準(zhǔn)確檢測(cè)。一般來說,，DLS的LOD對(duì)于顆粒濃度和粒徑范圍的要求要比人們通常理解的要高,。

2、多分散性和濃度影響：

在多分散體系或濃度過低的樣品中,，DLS難以區(qū)分各個(gè)不同大小的顆粒,，因此難以準(zhǔn)確給出一個(gè)統(tǒng)一的LOD。具體來說,，DLS的原理假設(shè)樣本都是單分散大小分布的（PDI<0.1甚至要更?。鴮?duì)于多分散的（例如大多數(shù)生物樣本）并不適合,；另外雖然DLS原理并不能計(jì)算濃度數(shù)據(jù),，但是DLS測(cè)樣對(duì)濃度卻是有要求的，不合適的上樣濃度會(huì)導(dǎo)致粒徑上的巨大偏差,，也容易被人忽視,。

瑞芯智造NanoCoulter納米庫(kù)爾特粒度儀應(yīng)用RPS技術(shù),，打破光學(xué)原理的局限性,，經(jīng)過十余年微納加工技術(shù)沉淀，創(chuàng)新光刻硅基固體納米孔芯片,，將經(jīng)典庫(kù)爾特技術(shù)的粒徑檢測(cè)范圍從微米級(jí)下探至納米級(jí),。同時(shí)依賴高靈敏皮安級(jí)電流檢測(cè)和信號(hào)噪音的分析處理可精準(zhǔn)降噪分析每個(gè)過孔顆粒，真正意義上的單顆粒檢測(cè),，可精確分析粒徑分布廣的多分散樣本,，具備更寬的粒徑LOD (15-2000 nm) 和極寬的濃度LOD (10⁶-10¹² particles/mL)。

參考文獻(xiàn)

[1] Welsh JA, Goberdhan DCI, O'Driscoll L, et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches [published correction appears in J Extracell Vesicles. 2024 May;13(5):e12451. doi: 10.1002/jev2.12451]. J Extracell Vesicles. 2024;13(2):e12404.

[2] Li Y, Zhang S, Liu C, et al. Thermophoretic glycan profiling of extracellular vesicles for triple-negative breast cancer management. Nat Commun. 2024;15(1):2292.

[3] Tian Y, Tian D, Peng X, Qiu H. Critical parameters to standardize the size and concentration determination of nanomaterials by nanoparticle tracking analysis. Int J Pharm. 2024;656:124097.