MLPA技術,，即多重連接探針擴增技術,，于2002年首先報道,，是近幾年發(fā)展起來的一種針對待檢DNA序列進行定性和半定量分析的新技術。該技術高效,、特異,，在一次反應中可以檢測45個核苷酸序列拷貝數(shù)的改變，已經(jīng)應用于多個領域,、多種疾病的研究,。下面讓我們一起來看看MLPA技術的試驗原理吧！

在MLPA實驗中,，純化的樣本DNA被變性,。之后用MLPA探針寡核苷酸孵育過夜。每個MLPA探針都具有針對特定基因組序列的探針,。每對MLPA探針包括兩條單鏈DNA:左側探針和右側探針寡核苷酸,。簡稱分別是LPO和RPO。LPO和RPO包含PCR引物和DNA雜交序列,。

在MLPA反應中,，左探針寡核苷酸（LPO）和右探針寡核苷酸（RPO）都與靶序列進行雜交，之后使用連接酶連接兩部分探針,。

將雜交的探針寡核苷酸連接到鄰近的目標序列,。探針連接產(chǎn)物的數(shù)量是樣品中目標序列數(shù)量的度量。連接反應具有高度特異性,，連接部位周圍沒有錯配,。

使用單個通用引物對在多重PCR中擴增連接的探針,。只有連接的探針呈指數(shù)級擴增，使得不需要去除未連接和未連接的探針,。

再通過毛細管電泳進行片段分離,，通過MRC Holland的分析軟件進行分析得出結論。PCR產(chǎn)物裝載到毛細管電置上,，按長度分離,。每個片段對應一個特定的MLPA探針。

MLPA結合了DNA探針雜交和PCR技術,，不僅可以用來檢測與疾病相關的CNV（?拷貝數(shù)變異）?,，?例如遺傳性乳腺癌、?結腸癌,、?杜氏肌營養(yǎng)不良等,，?還可以用于腫瘤中的CNV檢測，?以優(yōu)化腫瘤分型,。任何技術都有其優(yōu)缺點,。

優(yōu)點：

1、高效：一次反應可以檢測45個靶序列拷貝數(shù)的改變,。

2,、特異：可以檢測點突變。

3,、快速：一次實驗可以在24小時內(nèi)完成,。

4、簡便：不同的試劑盒操作基本相同,，容易掌握,。

缺點：

1,、需要精確測量DNA的濃度,，樣本容易被污染。

2,、不能用于單個細胞的檢測,。

3、MLPA用于檢測基因的缺失或重復,，不適合檢測未知的點突變類型,。

4、不能檢測染色體的平衡易位,。