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免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題分析

來源:上海喆圖科學(xué)儀器有限公司   2024年03月27日 17:02  
1. IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過深
一抗?jié)舛冗^高或孵育時(shí)間過長(zhǎng)——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間
孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育

2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色
石蠟切片脫蠟——延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間
蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時(shí)間
組織富含內(nèi)源性生物素與過氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無染色
一抗?jié)舛冗^低或孵育時(shí)間過短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)孵育時(shí)間
組織中無目的抗原的表達(dá)
一抗種屬來源與二抗不匹配

注意事項(xiàng)
切片脫蠟和水化要充分,,加反應(yīng)液時(shí)要覆蓋組織充分,;每次加液前甩干洗滌液,,同時(shí)防止干片,。
一抗的沖洗原則:?jiǎn)为?dú)沖洗,,防交叉反應(yīng)污染,;溫柔沖洗,,防止切片脫落;推薦浸洗方式,。
有條件的話最好立即拍照,,若不能及時(shí)拍照,也要封好片和用指甲油封固,,保持避光和濕度,。


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